全文摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
英文缩略词表 | 第12-13页 |
前言 | 第13-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-23页 |
1.生态学与流行病学 | 第14页 |
2.毒力因子 | 第14-17页 |
2.1 聚合蛋白(AS / Agg) | 第14-15页 |
2.2 胞外表面蛋白(Esp) | 第15页 |
2.3 微生物表面成分识别粘附基质分子(MSCRAMMs) | 第15页 |
2.4 溶细胞素(Cyl) | 第15-16页 |
2.5 透明质酸酶(Hyl) | 第16页 |
2.6 性信息素(Sex Pheromones) | 第16-17页 |
3.耐药特点 | 第17-19页 |
3.1 β-内酰胺类耐药 | 第17页 |
3.2 氨基糖苷类耐药 | 第17-18页 |
3.3 糖肽类耐药 | 第18页 |
3.4 利奈唑胺耐药 | 第18页 |
3.5 达托霉素耐药 | 第18-19页 |
4.生物被膜(BF) | 第19-23页 |
4.1 EPS与BF结构 | 第19-20页 |
4.2 胞外多糖 | 第20页 |
4.3 胞外蛋白 | 第20-21页 |
4.4 胞外DNA | 第21页 |
4.5 表面活性剂与脂类 | 第21-22页 |
4.6 水 | 第22-23页 |
第二章 试验内容 | 第23-61页 |
试验一 致羔羊脑炎粪肠球菌表面蛋白基因的检测 | 第23-29页 |
1.材料 | 第23-25页 |
1.1 样本及菌株来源 | 第23-24页 |
1.2 试剂 | 第24页 |
1.3 引物 | 第24页 |
1.4 仪器 | 第24-25页 |
1.5 主要缓冲液和试剂的配制 | 第25页 |
2.方法 | 第25页 |
2.1 表面蛋白基因的PCR扩增 | 第25页 |
3.结果 | 第25-27页 |
3.1 表面蛋白基因的PCR检测 | 第25-27页 |
4.讨论 | 第27-29页 |
试验二 致羔羊脑炎粪肠球菌EF3183基因的克隆与生物信息学分析 | 第29-38页 |
1. 材料 | 第29-30页 |
1.1 样本来源 | 第29-30页 |
1.2 试剂 | 第30页 |
2. 方法 | 第30-31页 |
2.1 引物的设计与合成 | 第30页 |
2.2 XJ11株羔羊脑炎粪肠球菌表面蛋白EF3183基因的PCR扩增 | 第30页 |
2.3 致羔羊脑炎粪肠球菌EF3183基因的克隆及鉴定 | 第30页 |
2.4 XJ11株表面蛋白EF3183基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第30-31页 |
2.5 XJ11株表面蛋白EF3183基因的系统进化分析 | 第31页 |
3. 结果 | 第31-37页 |
3.1 XJ11株细菌EF3183基因的PCR扩增与鉴定 | 第31-32页 |
3.2 XJ11株表面蛋白EF3183基因的生物信息学分析 | 第32-35页 |
3.3 系统进化分析 | 第35-37页 |
4. 讨论 | 第37-38页 |
试验三 致羔羊脑炎粪肠球菌XJ11-Δ3183突变株的构建 | 第38-45页 |
1. 材料 | 第38-40页 |
1.1 菌株、质粒 | 第38页 |
1.2 主要试剂 | 第38-39页 |
1.3 引物设计与合成 | 第39页 |
1.4 仪器 | 第39页 |
1.5 主要缓冲液和试剂的配制 | 第39-40页 |
2. 方法 (按吴利先方法进行[116]) | 第40-42页 |
2.1 XJ11培养及基因组DNA提取 | 第40页 |
2.2 EF3183基因插入片段的PCR扩增及回收纯化 | 第40-41页 |
2.3 pTX4577-Δ3183的构建 | 第41页 |
2.4 电转化用E. faecalis XJ11感受态细胞的制备(甘氨酸法) | 第41页 |
2.5 电转化 | 第41-42页 |
2.6 同源重组株的鉴定 | 第42页 |
3. 结果 | 第42-44页 |
3.1 EF3183基因插入片段PCR扩增结果 | 第42-43页 |
3.2 重组质粒pTX4577-Δ3183的双酶切鉴定结果 | 第43页 |
3.3 突变株的鉴定结果 | 第43-44页 |
4. 讨论 | 第44-45页 |
试验四 E. faecalis XJ11-Δ3183在细胞粘附、侵染及脏器载菌量与野毒株的对比研究 | 第45-52页 |
1. 材料 | 第46-47页 |
1.1 菌株和实验动物 | 第46页 |
1.2 主要试剂 | 第46页 |
1.3 主要仪器 | 第46页 |
1.4 主要试剂的配置 | 第46-47页 |
2 方法 | 第47-48页 |
2.1 HeLa细胞粘附与粘附抑制试验 | 第47页 |
2.2 RAW264.7 侵染试验 | 第47-48页 |
2.3 小鼠心、肝、脾、肾载菌量的测定 | 第48页 |
3. 结果 | 第48-50页 |
3.1 HeLa细胞粘附与粘附抑制试验 | 第48-49页 |
3.2 小鼠RAW264.7 细胞侵染试验 | 第49页 |
3.3 小鼠载菌量测定结果 | 第49-50页 |
4. 讨论 | 第50-52页 |
试验五 E. faecalis XJ11-Δ3183生物被膜形成能力的研究 | 第52-61页 |
1.材料 | 第52-53页 |
1.1 菌株 | 第52页 |
1.2 主要试剂 | 第52-53页 |
1.3 主要仪器 | 第53页 |
1.4 主要试剂配置 | 第53页 |
2.方法 | 第53-54页 |
2.1 96孔板定量检测法(polystyrene microtiter plate assay)检测BF形成量 | 第53-54页 |
2.2 BF形态结构的观察 | 第54页 |
3.结果 | 第54-59页 |
3.1 BF形成量的测定结果 | 第54-55页 |
3.2 BF形态结构的观察 | 第55-59页 |
4.讨论 | 第59-61页 |
全文结论 | 第61-63页 |
参考文献 | 第63-72页 |
致谢 | 第72-73页 |
附录 | 第73-74页 |
作者简历 | 第74-75页 |
附件 | 第75页 |