| 摘要 | 第12-14页 |
| 英文摘要 | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第17-29页 |
| 1.1 香鳞毛蕨研究概述 | 第17-19页 |
| 1.1.1 香磷毛蕨的分布及生态环境 | 第17页 |
| 1.1.2 形态解剖学研究 | 第17-18页 |
| 1.1.3 化学成分及药理作用 | 第18-19页 |
| 1.2 黄酮类化合物的研究概况 | 第19-23页 |
| 1.2.1 黄酮类化合物的结构及分类 | 第19-20页 |
| 1.2.2 黄酮类化合物的生理活性 | 第20-22页 |
| 1.2.3 黄酮类化合物的合成途径 | 第22-23页 |
| 1.2.4 蕨类植物黄酮类化合物的研究概况 | 第23页 |
| 1.3 黄酮合成途径关键酶的研究进展 | 第23-27页 |
| 1.3.1 苯丙氨酸解氨酶的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.3.2 肉桂酸 4-羟化酶(C4H)的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.3.3 查尔酮合成酶(CHS)的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.3.4 查尔酮异构酶(CHI)的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.3.5 黄烷酮3羟化酶(F3H)的研究进展 | 第27页 |
| 1.4 本研究的目的、意义和技术路线 | 第27-29页 |
| 1.4.1 研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-56页 |
| 2.1 试验材料及其处理 | 第29页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第29页 |
| 2.1.2 材料的组织培养 | 第29页 |
| 2.2 菌株和载体 | 第29页 |
| 2.2.1 大肠杆菌菌株 | 第29页 |
| 2.2.2 农杆菌菌株 | 第29页 |
| 2.2.3 载体 | 第29页 |
| 2.3 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.4 主要药品及试剂 | 第30-31页 |
| 2.4.1 限制性内切酶 | 第30页 |
| 2.4.2 分子量标准 | 第30页 |
| 2.4.3 抗生素配置 | 第30页 |
| 2.4.4 培养基配置 | 第30页 |
| 2.4.5 其他常用试剂 | 第30-31页 |
| 2.5 黄酮合成关键酶基因的转录组数据筛选 | 第31页 |
| 2.5.1 关键酶基因的筛选 | 第31页 |
| 2.5.2 关键酶基因的电子克隆 | 第31页 |
| 2.6 黄酮合成关键酶基因片段的克隆及序列分析 | 第31-38页 |
| 2.6.1 香鳞毛蕨总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.6.2 RNA纯度及浓度检测 | 第32页 |
| 2.6.3 香鳞毛蕨c DNA的合成 | 第32页 |
| 2.6.4 Df CHI基因保守片段的克隆及序列分析 | 第32-35页 |
| 2.6.5 Df F3H基因保守片段的克隆及序列分析 | 第35-36页 |
| 2.6.6 Df PAL基因家族的筛选及序列分析 | 第36-37页 |
| 2.6.7 Df C4H基因保守片段的克隆及序列分析 | 第37-38页 |
| 2.7 黄酮合成关键酶基因在不同条件下的表达特性分析 | 第38-40页 |
| 2.7.1 试验材料的处理 | 第38页 |
| 2.7.2 香鳞毛蕨RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.7.3 香鳞毛蕨c DNA的合成 | 第39页 |
| 2.7.4 Df PAL基因家族及Df C4H实时荧光定量PCR测定 | 第39-40页 |
| 2.8 黄酮合成关键酶基因c DNA全长的克隆及序列分析 | 第40-48页 |
| 2.8.1 Df PAL3基因c DNA全长的获得 | 第40-45页 |
| 2.8.2 Df PAL3基因ORF的生物信息学分析 | 第45页 |
| 2.8.3 Df C4H基因c DNA全长的获得 | 第45-48页 |
| 2.8.4 Df C4H基因ORF的生物信息学分析 | 第48页 |
| 2.9 植物表达载体构建及农杆菌转化 | 第48-53页 |
| 2.9.1 Df C4H开放阅读框的获得 | 第48页 |
| 2.9.2 Df C4H植物表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 2.9.3 Df CHS开放阅读框的获得 | 第50-51页 |
| 2.9.4 Df CHS植物表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.9.5 拟南芥的种植 | 第52页 |
| 2.9.6 农杆菌菌液的制备 | 第52-53页 |
| 2.9.7 对拟南芥的遗传转化 | 第53页 |
| 2.10 转基因拟南芥的检测及功能分析 | 第53-56页 |
| 2.10.1 转基因拟南芥的筛选 | 第53-54页 |
| 2.10.2 转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第54页 |
| 2.10.3 转基因拟南芥第一代谢产物的测定 | 第54-55页 |
| 2.10.4 转基因拟南芥生理指标的测定 | 第55-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-105页 |
| 3.1 基因片段的转录组数据筛选 | 第56-60页 |
| 3.1.1 关键酶基因的筛选 | 第56-57页 |
| 3.1.2 关键酶基因的电子克隆 | 第57-60页 |
| 3.2 黄酮合成关键酶基因片段的克隆及序列分析 | 第60-69页 |
| 3.2.1 Df CHI基因片段的克隆及序列分析 | 第60-62页 |
| 3.2.2 Df F3H基因片段的克隆及序列分析 | 第62-64页 |
| 3.2.3 Df PAL基因家族的筛选及序列分析 | 第64-68页 |
| 3.2.4 Df C4H基因保守片段的克隆与序列分析 | 第68-69页 |
| 3.3 黄酮合成关键酶基因在不同条件下的表达特性分析 | 第69-72页 |
| 3.3.1 Df PAL基因家族及Df C4H的组织特异性表达 | 第69-71页 |
| 3.3.2 Df PAL基因家族及Df C4H在低温条件下的表达分析 | 第71页 |
| 3.3.3 Df PAL基因家族及Df C4H在高温条件下的表达分析 | 第71页 |
| 3.3.4 Df PAL基因家族及Df C4H在紫外条件下的表达分析 | 第71-72页 |
| 3.4 DFPAL3基因c DNA全长的获得 | 第72-74页 |
| 3.4.1 Df PAL3基因片段的克隆 | 第72-73页 |
| 3.4.2 通过 3′RACE获得Df PAL3基因的 3′端序列 | 第73页 |
| 3.4.3 通过 5′RACE获得Df PAL3基因的 5′端序列 | 第73页 |
| 3.4.4 Df PAL3基因c DNA全长的克隆 | 第73-74页 |
| 3.5 DFPAL3基因的生物信息学分析 | 第74-81页 |
| 3.5.1 Df PAL3基因的c DNA序列及特征 | 第74-75页 |
| 3.5.2 Df PAL3基因ORF序列Blastx分析 | 第75页 |
| 3.5.3 Df PAL3蛋白一级结构的预测及分析 | 第75-76页 |
| 3.5.4 Df PAL3蛋白二级结构的预测及分析 | 第76-77页 |
| 3.5.5 Df PAL3蛋白功能区的预测及定位分析 | 第77-78页 |
| 3.5.6 Df PAL3蛋白的信号肽预测 | 第78-79页 |
| 3.5.7 Df PAL3基因编码蛋白质的蛋白跨膜区分析 | 第79页 |
| 3.5.8 Df PAL3基因编码蛋白质的卷曲螺旋预测 | 第79页 |
| 3.5.9 Df PAL3基因编码蛋白质的糖基化位点分析 | 第79-80页 |
| 3.5.10 Df PAL3基因编码蛋白质的磷酸化位点预测 | 第80页 |
| 3.5.11 Df PAL3基因编码蛋白三级结构的预测及分析 | 第80-81页 |
| 3.5.12 Df PAL3基因编码蛋白质的多重比较及系统进化树构建 | 第81页 |
| 3.6 DFC4H基因c DNA全长的获得 | 第81-87页 |
| 3.6.1 Df C4H基因保守片段的克隆与序列分析 | 第81页 |
| 3.6.2 通过 3′RACE获得Df C4H基因的 3′端序列 | 第81-86页 |
| 3.6.3 通过 5′RACE获得Df C4H基因的 5′端序列 | 第86-87页 |
| 3.6.4 Df C4H基因ORF的克隆 | 第87页 |
| 3.7 DFC4H基因的生物信息学分析 | 第87-98页 |
| 3.7.1 Df C4H基因的c DNA序列及特征 | 第87-89页 |
| 3.7.2 Df C4H基因ORF序列Blastx分析 | 第89页 |
| 3.7.3 Df C4H蛋白一级结构的预测及分析 | 第89-90页 |
| 3.7.4 Df C4H蛋白二级结构的预测及分析 | 第90-91页 |
| 3.7.5 Df C4H蛋白功能区的预测及定位分析 | 第91-92页 |
| 3.7.6 Df C4H基因编码氨基酸的信号肽预测 | 第92页 |
| 3.7.7 Df C4H基因编码氨基酸的蛋白跨膜区分析 | 第92页 |
| 3.7.8 Df C4H基因编码氨基酸的卷曲螺旋预测 | 第92-93页 |
| 3.7.9 Df C4H基因编码氨基酸的糖基化位点分析 | 第93-94页 |
| 3.7.10 Df C4H基因编码氨基酸的磷酸化位点预测 | 第94页 |
| 3.7.11 Df C4H基因编码蛋白三级结构的预测及分析 | 第94页 |
| 3.7.12 Df C4H基因编码氨基酸序列多重比较及系统进化树构建 | 第94-98页 |
| 3.8 植物表达载体的构建及农杆菌转化 | 第98-101页 |
| 3.8.1 Df C4H基因开放阅读框的克隆及表达载体的构建 | 第98页 |
| 3.8.2 p BI121-Df C4H植物表达载体的双酶切鉴定 | 第98-99页 |
| 3.8.3 p BI121-Df C4H重组质粒导入根癌农杆菌 | 第99页 |
| 3.8.4 Df CHS基因开放阅读框的克隆 | 第99-100页 |
| 3.8.5 p BI121-Df CHS载体的构建 | 第100页 |
| 3.8.6 p BI121-Df CHS的双酶切鉴定 | 第100-101页 |
| 3.8.7 p BI121-Df CHS重组质粒导入根癌农杆菌 | 第101页 |
| 3.9 转基因拟南芥的检测及功能分析 | 第101-105页 |
| 3.9.1 转基因拟南芥的筛选 | 第101-102页 |
| 3.9.2 转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第102-103页 |
| 3.9.3 转基因拟南芥的第一代谢产物的测定 | 第103页 |
| 3.9.4 转基因拟南芥的生理指标的测定 | 第103-105页 |
| 4. 讨论 | 第105-111页 |
| 4.1 香鳞毛蕨黄酮合成关键酶基因的选择 | 第105-106页 |
| 4.2 黄酮合成关键酶基因保守序列的克隆及分析 | 第106页 |
| 4.3 不同温度及紫外处理对基因表达特性的影响 | 第106-108页 |
| 4.4 基因全长的获得及生物信息学分析 | 第108-109页 |
| 4.5 基因过表达植株的获得 | 第109页 |
| 4.6 过表达基因对代谢产物的影响 | 第109-110页 |
| 4.7 提高代谢产物含量的调控因子 | 第110-111页 |
| 5 结论 | 第111-112页 |
| 6 创新点 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-128页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第128页 |
