| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 Hnrnpk基因的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 Hnrnpk的起源与发现 | 第12-13页 |
| 1.1.2 Hnrnpk的结构特点 | 第13-14页 |
| 1.1.3 Hnrnpk基因的表达 | 第14页 |
| 1.1.4 Hnrnpk基因的功能 | 第14-17页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第17-22页 |
| 1.2.1 基因编辑技术发展历程 | 第17-18页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas的起源 | 第18-19页 |
| 1.2.3 CRISPR系统的结构和分类 | 第19-20页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9作用机理 | 第20-21页 |
| 1.2.5 CRISPR/Cas9在基因编辑中的应用 | 第21-22页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 Hnrnpk基因靶位点的确定和Cas9质粒构建 | 第23-29页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 材料 | 第23-24页 |
| 2.2.1 主要试验材料 | 第23页 |
| 2.2.2 主要试验仪器设备 | 第23页 |
| 2.2.3 主要试验试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.4 主要溶液的配制 | 第24页 |
| 2.3 试验方法 | 第24-26页 |
| 2.3.1 Hnrnpk靶位点的设计与合成 | 第24页 |
| 2.3.2 oligo二聚体（oligoduplex）的形成 | 第24-25页 |
| 2.3.3 oligo二聚体插入到载体中 | 第25页 |
| 2.3.4 重组载体转化至大肠杆菌 | 第25页 |
| 2.3.5 阳性菌落的挑取与培养 | 第25页 |
| 2.3.6 阳性克隆的鉴定 | 第25页 |
| 2.3.7 菌液扩大培养 | 第25页 |
| 2.3.8 无内毒素质粒大量提取 | 第25-26页 |
| 2.4 结果与分析 | 第26-28页 |
| 2.4.1 Hnrnpk靶位点的设计与合成 | 第26-27页 |
| 2.4.2 重组载体的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4.3 质粒浓度的测定 | 第28页 |
| 2.5 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 Hnrnpk基因敲除C2C12细胞株筛选 | 第29-40页 |
| 3.1 引言 | 第29页 |
| 3.2 材料 | 第29-30页 |
| 3.2.1 主要试验材料 | 第29页 |
| 3.2.2 主要试验仪器设备 | 第29页 |
| 3.2.3 主要试验试剂耗材 | 第29-30页 |
| 3.2.4 主要溶液配方 | 第30页 |
| 3.3 试验方法 | 第30-34页 |
| 3.3.1 C2C12细胞的复苏、培养及冻存 | 第30-31页 |
| 3.3.2 细胞转染 | 第31-32页 |
| 3.3.3 T7EI酶切法检测靶位点突变率 | 第32-33页 |
| 3.3.4 嘌呤霉素药物筛选阳性细胞 | 第33页 |
| 3.3.5 单克隆细胞挑选 | 第33-34页 |
| 3.3.6 Hnrnpk基因突变细胞株的筛选及鉴定 | 第34页 |
| 3.4 结果与分析 | 第34-39页 |
| 3.4.1 Cas9/gRNA重组载体转染至C2C12细胞 | 第34-35页 |
| 3.4.2 T7EI酶切法检测靶位点突变 | 第35-36页 |
| 3.4.3 嘌呤霉素药物筛选阳性细胞 | 第36页 |
| 3.4.5 单克隆细胞挑选及鉴定 | 第36-39页 |
| 3.5 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 突变型细胞株的生物学功能研究 | 第40-61页 |
| 4.1 引言 | 第40页 |
| 4.2 材料 | 第40-41页 |
| 4.2.1 主要试验材料 | 第40页 |
| 4.2.2 主要试验仪器设备 | 第40页 |
| 4.2.3 主要实验试剂耗材 | 第40-41页 |
| 4.2.4 主要溶液配方 | 第41页 |
| 4.3 试验方法 | 第41-48页 |
| 4.3.1 细胞传代培养 | 第41-42页 |
| 4.3.2 细胞分化培养 | 第42页 |
| 4.3.3 蛋白质的提取 | 第42页 |
| 4.3.4 BCA法测定蛋白浓度 | 第42页 |
| 4.3.5 Western blotting | 第42-44页 |
| 4.3.6 细胞免疫荧光 | 第44页 |
| 4.3.7 MTT检测细胞增殖 | 第44-45页 |
| 4.3.8 PI法检测细胞周期 | 第45页 |
| 4.3.9 转录组测序 | 第45-48页 |
| 4.4 结果与分析 | 第48-59页 |
| 4.4.1 Hnrnpk基因突变后蛋白结构分析 | 第48-49页 |
| 4.4.2 Hnrnpk基因敲除后细胞形态学改变 | 第49-50页 |
| 4.4.3 Hnrnpk敲除后对细胞增殖的影响 | 第50-51页 |
| 4.4.4 PI法检测细胞周期 | 第51-52页 |
| 4.4.5 细胞诱导分化 | 第52-53页 |
| 4.4.6 RNA-Seq结果分析 | 第53-59页 |
| 4.5 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 小结 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-77页 |
| 攻读学位期间获得与学位论文相关的科研成果目录 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-115页 |
