| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 羧酸酯酶概述 | 第12页 |
| 2 猪肝羧酸酯酶 | 第12-15页 |
| 2.1 猪肝羧酸酯酶概述 | 第12页 |
| 2.2 猪肝羧酸酯酶同工酶的分类 | 第12-14页 |
| 2.3 猪肝羧酸酯酶的水解活性 | 第14-15页 |
| 2.4 猪肝羧酸酯酶的表达 | 第15页 |
| 3 大肠杆菌表达系统 | 第15-17页 |
| 3.1 大肠杆菌表达系统概述 | 第15-16页 |
| 3.2 大肠杆菌表达系统组成 | 第16页 |
| 3.2.1 表达质粒 | 第16页 |
| 3.2.2 宿主菌 | 第16页 |
| 3.3 包涵体的形成与可溶性表达 | 第16-17页 |
| 4 启动子的研究 | 第17-20页 |
| 4.1 启动子概述 | 第17-18页 |
| 4.1.1 原核生物启动子 | 第17-18页 |
| 4.1.2 真核生物启动子 | 第18页 |
| 4.2 启动子的研究方法 | 第18-20页 |
| 4.2.1 生物信息学分析法 | 第18-19页 |
| 4.2.2 5'RACE | 第19页 |
| 4.2.3 转染分析 | 第19页 |
| 4.2.4 EMSA | 第19-20页 |
| 第二章 猪PLE1的功能性表达 | 第20-38页 |
| 1 研究目的和意义 | 第20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 质粒及菌株 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 试验动物 | 第22页 |
| 2.1.5 主要数据库及分析软件 | 第22页 |
| 2.1.6 试剂配制 | 第22-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-31页 |
| 2.2.1 猪肝羧酸酯酶PLE的克隆 | 第24-27页 |
| 2.2.2 PLE1原核表达质粒的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.3 PLE1的功能性表达与纯化 | 第29-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-35页 |
| 3.1 PLE基因的RT-PCR扩增结果 | 第31-32页 |
| 3.2 PLE1的克隆 | 第32页 |
| 3.3 PLE1原核表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| 3.4 PLE1的功能性表达及检测 | 第33-34页 |
| 3.4.1 PLE1的功能性表达 | 第33-34页 |
| 3.4.2 表达产物存在形式检测 | 第34页 |
| 3.4.3 表达产物的纯化 | 第34页 |
| 3.5 PLE1重组蛋白酶活性的检测 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 4.1 PLE1的克隆 | 第35页 |
| 4.2 菌种和载体的选择 | 第35-36页 |
| 4.3 诱导表达条件的选择 | 第36页 |
| 4.4 重组蛋白的纯化 | 第36页 |
| 4.5 重组蛋白酶活性的检测 | 第36-37页 |
| 5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 猪PLE1分子调控机制的研究 | 第38-74页 |
| 1 研究目的和意义 | 第38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-57页 |
| 2.1 试验材料 | 第38-42页 |
| 2.1.1 质粒及菌株 | 第38页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第38-40页 |
| 2.1.3 主要器材 | 第40页 |
| 2.1.4 试验动物 | 第40-41页 |
| 2.1.5 主要数据库及分析软件 | 第41页 |
| 2.1.6 试剂配制 | 第41-42页 |
| 2.2 试验方法 | 第42-57页 |
| 2.2.1 转录因子起始位点的鉴定 | 第42-48页 |
| 2.2.2 双荧光体系表达载体的构建 | 第48-51页 |
| 2.2.3 转录因子表达载体的构建 | 第51-54页 |
| 2.2.4 细胞培养 | 第54页 |
| 2.2.5 细胞转染及双荧光素酶活性的测定 | 第54-55页 |
| 2.2.6 凝胶迁移试验(EMSA) | 第55-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-70页 |
| 3.1 PLE1基因启动子片段的克隆 | 第57页 |
| 3.2 PLE1基因启动子序列的生物信息学分析 | 第57-58页 |
| 3.3 PLE1基因转录起始位点的鉴定 | 第58页 |
| 3.4 PLE1基因启动子活性的检测 | 第58页 |
| 3.4.1 PLE1基因启动子荧光报告基因载体的构建 | 第58页 |
| 3.4.2 PLE1基因启动子活性鉴定 | 第58页 |
| 3.5 PLE1基因启动子重要反应元件的初步鉴定 | 第58-65页 |
| 3.5.1 PLE1基因启动子缺失质粒的构建 | 第58-60页 |
| 3.5.2 PLE1基因核心启动子区的确定 | 第60页 |
| 3.5.3 PLE1基因启动子突变质粒的构建 | 第60页 |
| 3.5.4 PLE1核心启动子突变质粒活性分析 | 第60-65页 |
| 3.6 核转录因子与PLE1启动子相互作用的鉴定 | 第65-67页 |
| 3.6.1 SP1和SP3与PLE1启动子的互作 | 第65-66页 |
| 3.6.2 C/EBPα和C/EBPβ与PLE1启动子的互作 | 第66-67页 |
| 3.7 多种转录因子对PLE1启动子的转录调控 | 第67-70页 |
| 3.7.1 表达质粒的构建 | 第67-68页 |
| 3.7.2 共转染试验分析 | 第68-70页 |
| 4 讨论 | 第70-73页 |
| 4.1 生物信息学在启动子研究上的应用 | 第70-71页 |
| 4.2 5'RACE鉴定PLE1基因的转录起始位点 | 第71页 |
| 4.3 PLE1启动子活性的研究 | 第71页 |
| 4.4 GC盒对PLE1启动子的重要性 | 第71-72页 |
| 4.5 C/EBP转录因子结合位点对PLE1启动子的重要性 | 第72页 |
| 4.6 多种转录因子在PLE1启动子反式激活过程中发挥的作用 | 第72-73页 |
| 5 本章小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| 在读期间发表文章题录 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
