| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 1. 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 三磷酸腺苷及其相关的酶 | 第10-13页 |
| 1.1.1 高能磷酸化合物 | 第10页 |
| 1.1.2 三磷酸腺苷(ATP) | 第10-11页 |
| 1.1.3 ATP酶 | 第11-13页 |
| 1.2 DNA损伤及修复 | 第13-15页 |
| 1.2.1 DNA的损伤 | 第13页 |
| 1.2.2 DNA的修复 | 第13-15页 |
| 1.3 同源重组 | 第15-19页 |
| 1.3.1 同源重组的分子模型 | 第15-16页 |
| 1.3.2 同源重组相关的酶 | 第16页 |
| 1.3.3 利用同源重组构建质粒 | 第16-17页 |
| 1.3.4 同源重组的发展及应用 | 第17-19页 |
| 1.4 本论文思路 | 第19-22页 |
| 2. 利用酿酒酵母高效同源重组系统构建广谱性质粒pXZ200 | 第22-40页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第22-25页 |
| 2.1.1 主要仪器和试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.2 菌种和质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 培养基和缓冲液的配制 | 第23-24页 |
| 2.1.4 引物合成 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-33页 |
| 2.2.1 重组片段的准备 | 第25-27页 |
| 2.2.2 感受态细胞的制备 | 第27-29页 |
| 2.2.3 电转重组及筛选 | 第29-31页 |
| 2.2.4 构建质粒pXZ200在酿酒酵母菌中的稳定性 | 第31页 |
| 2.2.5 构建质粒pXZ200在DH5α菌中的稳定性 | 第31-32页 |
| 2.2.6 质粒pXZ200在KT2440菌中的稳定性 | 第32-33页 |
| 2.3 结果 | 第33-39页 |
| 2.3.1 重组片段PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| 2.3.2 重组子的验证及pXZ200在酵母中的稳定性 | 第34-37页 |
| 2.3.3 质粒pXZ200在恶臭假单胞菌和大肠杆菌中的稳定性 | 第37-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-40页 |
| 3. 利用酿酒酵母同源重组构建ATP酶基因突变型质粒pBB-ATP | 第40-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第40页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第40页 |
| 3.1.4 引物合成 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 KT2440基因组的提取 | 第41-42页 |
| 3.2.2 重组片段的扩增及回收 | 第42-43页 |
| 3.2.3 电转 | 第43页 |
| 3.2.4 重组子的筛选 | 第43-44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-47页 |
| 3.3.1 基因组提取结果 | 第44页 |
| 3.3.2 重组片段回收结果 | 第44-45页 |
| 3.3.3 电转后重组子的筛选结果 | 第45-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 4. pBB-ATP质粒对大肠杆菌生长的影响 | 第49-57页 |
| 4.1 材料和仪器 | 第49页 |
| 4.1.1 培养基 | 第49页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 4.2.1 将质粒pBB-ATP转化大肠杆菌DH5α | 第49页 |
| 4.2.2 含有pBB-ATP质粒的大肠杆菌DH5α的筛选 | 第49-50页 |
| 4.2.3. 大肠杆菌生长曲线绘制及相对得率系数的计算 | 第50页 |
| 4.2.4 大肠杆菌呼吸速率的测定 | 第50-51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-55页 |
| 4.3.1 DH5α中提取质粒pBB-ATP的结果 | 第51页 |
| 4.3.2 DH5α中提取的pBB-ATP质粒PCR验证结果 | 第51-52页 |
| 4.3.3 大肠杆菌生长曲线及相对得率系数的测定 | 第52-53页 |
| 4.3.4 DH5α和pBB-ATP DH5α的呼吸速率结果 | 第53-55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录A | 第64-67页 |
| 附录B | 第67-69页 |
| 附录C | 第69页 |
