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绿僵菌细胞壁合成相关基因MaFKS和MaChsⅦ的克隆及功能分析

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-12页
1 绪 论第12-20页
   ·引言第12-13页
   ·研究背景第13-18页
     ·昆虫病原真菌的致病机制及研究进展第13-15页
     ·真菌细胞壁的相关研究进展第15-18页
   ·立题依据及研究目的第18页
   ·研究内容第18-19页
   ·技术路线第19页
   ·本研究创新之处第19-20页
2 绿僵菌MaFKS 的功能研究第20-46页
   ·主要材料第20-22页
     ·供试菌株第20页
     ·主要试剂第20-21页
     ·主要培养基及溶液第21页
     ·主要设备第21-22页
   ·主要方法第22-34页
     ·真菌RNA 的提取及反转录第22-24页
     ·大肠杆菌感受的制备及转化第24页
     ·根癌农杆菌感受态的制备及转化第24-25页
     ·真菌基因组提取方法第25页
     ·绿僵菌MaFKS 基因DNA 序列的比对第25-26页
     ·绿僵菌MaFKS 基因cDNA 全长的获得第26-27页
     ·MaFKS 基因生物信息学分析第27页
     ·MaFKS 基因干扰载体的构建第27-30页
     ·农杆菌介导的绿僵菌的遗传转化第30页
     ·MaFKS 基因干扰突变菌株的筛选第30-31页
     ·荧光定量PCR 技术检测干扰效率第31-32页
     ·干扰菌株对细胞壁干扰剂敏感性的分析第32页
     ·干扰菌株渗透压耐受性的分析第32页
     ·产孢量的测定第32页
     ·菌丝β-1,3-葡聚糖含量的测定及荧光染色第32-34页
   ·结果与分析第34-43页
     ·获取MaFKS 基因的cDNA 序列的克隆及序列分析第34页
     ·MaFKS 基因的生物信息学分析第34-37页
     ·干扰突变菌株的筛选与分子验证第37页
     ·干扰突变菌株MaFKS 基因的表达被有效降低第37-38页
     ·MaFKS 影响绿僵菌细胞壁的完整性第38-40页
     ·MaFKS 影响绿僵菌对高渗透压的耐受性第40-41页
     ·MaFKS 影响绿僵菌的产孢量第41-42页
     ·MaFKS 干扰突变菌株菌丝β-1,3-葡聚糖的含量降低第42-43页
   ·讨论第43-46页
     ·MaFKS 基因与细胞壁的完整性相关第43-44页
     ·MaFKS 与绿僵菌对高渗透压的耐受性有关第44页
     ·MaFKS 的表达水平影响绿僵菌的产孢量第44页
     ·RNA 干扰(RNAi)技术第44-46页
3 MaChsⅦ 的功能研究第46-60页
   ·主要材料第46页
     ·供试菌株和昆虫第46页
     ·主要试剂第46页
     ·主要培养基及溶液第46页
     ·主要设备第46页
   ·主要方法第46-50页
     ·真菌RNA 及基因组DNA 的提取第46页
     ·大肠杆菌感受的制备及转化第46页
     ·根癌农杆菌感受态的制备及转化第46页
     ·MaChsⅦ cDNA 序列的克隆及DNA 序列的获得第46页
     ·MaChsⅦ 基因的生物信息学分析第46-47页
     ·MaChsⅦ 基因敲除载体的构建策略第47-49页
     ·绿僵菌的遗传转化第49页
     ·MaChsⅦ 基因敲除突变菌株的筛选第49页
     ·MaChsⅦ缺失菌株对细胞壁干扰剂敏感性的分析第49页
     ·MaChsⅦ缺失菌株渗透压耐受性的分析第49页
     ·MaChsⅦ缺失菌株对氧胁迫的分析第49-50页
     ·生物测定第50页
   ·结果与分析第50-57页
     ·MaChsⅦ 基因的克隆及序列分析第50-53页
     ·缺失突变菌株的筛选与分子验证第53-54页
     ·MaChsⅦ 影响绿僵菌细胞壁的完整性第54-55页
     ·MaChsⅦ 影响绿僵菌对高渗透压的耐受性第55-56页
     ·MaChsⅦ 影响绿僵菌的毒力第56-57页
   ·讨论第57-60页
     ·MaChsⅦ基因与绿僵菌细胞壁的完整性相关第58页
     ·MaChsⅦ基因与绿僵菌渗透压的耐受性相关第58页
     ·MaChsⅦ基因的缺失降低了绿僵菌的毒力第58-59页
     ·基因敲除第59-60页
4 主要结论及后续工作展望第60-64页
   ·主要研究结论第60-62页
   ·后续试验建议第62-64页
致谢第64-66页
参考文献第66-75页
附录第75-82页
 A. 序列第75-81页
 B. 缩写第81-82页
 C. 作者硕士学习期间发表论文目录第82页

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