| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 ALDC概述 | 第11-12页 |
| 1.2 ALDC的活性调节 | 第12页 |
| 1.3 ALDC的结构研究 | 第12-14页 |
| 1.4 ALDC的催化机制研究 | 第14-15页 |
| 1.5 ALDC基因的重组表达与理化性质研究 | 第15-16页 |
| 1.5.1 ALDC基因克隆与表达 | 第15页 |
| 1.5.2 ALDC的理化性质 | 第15-16页 |
| 1.6 ALDC的应用 | 第16-19页 |
| 1.6.1 啤酒发酵工业 | 第16-17页 |
| 1.6.2 合成单一手性化合物 | 第17-19页 |
| 1.7 本论文的选题依据与研究内容 | 第19-20页 |
| 2 ALDC基因重组表达与纯化 | 第20-40页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.2 主要实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.3 主要溶液配制 | 第22-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.3.1 ALDC基因的克隆 | 第23-25页 |
| 2.3.2 重组大肠杆菌的构建 | 第25-27页 |
| 2.3.3 重组基因pET-21b-ALDC的表达 | 第27-28页 |
| 2.3.4 IPTG诱导条件的优化 | 第28-29页 |
| 2.3.5 ALDC分离纯化 | 第29页 |
| 2.3.6 重组表达ALDC含量的测定 | 第29-30页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第30-39页 |
| 2.4.1 ALDC基因克隆 | 第30-31页 |
| 2.4.2 构建大肠杆菌重组菌体 | 第31-33页 |
| 2.4.3 SDS-PAGE检测重组基因pET-21b-ALDC表达 | 第33-34页 |
| 2.4.4 IPTG诱导时间与使用浓度 | 第34-35页 |
| 2.4.5 ALDC分离纯化 | 第35-38页 |
| 2.4.6 ALDC纯化倍数及回收率 | 第38-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 3 ALDC生物信息学分析 | 第40-49页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 生物信息学软件及网络服务器 | 第40页 |
| 3.3 分析方法 | 第40-42页 |
| 3.3.1 ALDC氨基酸序列比对与系统发育树构建 | 第40-41页 |
| 3.3.2 ALDC三维结构模拟 | 第41页 |
| 3.3.3 ALDC与底物分子对接 | 第41-42页 |
| 3.4 分析结果与讨论 | 第42-48页 |
| 3.4.1 氨基酸序列相似性比对 | 第42页 |
| 3.4.2 构建系统发育树 | 第42-43页 |
| 3.4.3 ALDC的同源模建 | 第43-45页 |
| 3.4.4 分子对接 | 第45-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 4 ALDC酶学性质分析 | 第49-60页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第49页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第49页 |
| 4.2.3 主要溶液配制 | 第49-50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50-52页 |
| 4.3.1 外消旋α-乙酰乳酸为底物测定ALDC酶活性 | 第50-51页 |
| 4.3.2 pH对ALDC活性影响的测定 | 第51页 |
| 4.3.3 金属离子对ALDC活性影响的测定 | 第51页 |
| 4.3.4 酶反应动力学常数的测定 | 第51-52页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第52-59页 |
| 4.4.1 ALDC的酶活性 | 第52-56页 |
| 4.4.2 ALDC的最适pH | 第56页 |
| 4.4.3 金属离子对ALDC活性的影响 | 第56-58页 |
| 4.4.4 Km及Kcat测定结果分析 | 第58-59页 |
| 4.5 小结 | 第59-60页 |
| 结论与展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录A 缩略语表及名称说明 | 第66-67页 |
| 附录B-Ⅰ pMD19-T质粒谱图 | 第67页 |
| 附录B-Ⅱ pET-21b质粒谱图 | 第67-68页 |
| 附录C 测序结果 | 第68-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
