| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 泛素化修饰及其研究概况 | 第13-15页 |
| 1.1.1 泛素化修饰 | 第13-14页 |
| 1.1.2 泛素化修饰的功能研究 | 第14-15页 |
| 1.2 类泛素化修饰及SUMOylation修饰研究概况 | 第15-17页 |
| 1.2.1 类泛素化修饰 | 第15-16页 |
| 1.2.2 SUMOylation修饰及其功能介绍 | 第16-17页 |
| 1.2.3 家蚕SUMOylation修饰的研究 | 第17页 |
| 1.3 NEDDylation修饰及其研究概况 | 第17-20页 |
| 1.3.1 NEDDylation修饰 | 第17-19页 |
| 1.3.2 NEDDylation修饰功能及其参与细胞周期调控 | 第19-20页 |
| 1.4 NEDDylation修饰与其它修饰之间的关系 | 第20-23页 |
| 第二章 引言 | 第23-25页 |
| 2.1 研究背景、目的及意义 | 第23-24页 |
| 2.2 研究内容 | 第24页 |
| 2.3 研究技术路线 | 第24-25页 |
| 第三章 家蚕NEDDylation修饰基因的鉴定、表达特征及亚细胞定位 | 第25-37页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第25-27页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第25页 |
| 3.1.2 实验仪器与试剂 | 第25-26页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-31页 |
| 3.2.1 基因克隆和信息分析 | 第27-29页 |
| 3.2.2 NEDDylation修饰基因时期表达分析 | 第29-30页 |
| 3.2.3 BmNedd8基因各组织表达芯片分析 | 第30页 |
| 3.2.4 家蚕卵巢细胞系BmN4-SID I细胞培养 | 第30-31页 |
| 3.2.5 免疫荧光 | 第31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-36页 |
| 3.3.1 家蚕NEDDylation修饰基因的鉴定与克隆 | 第31-32页 |
| 3.3.2 BmNedd8基因的多序列比对 | 第32-33页 |
| 3.3.3 BmNedd8基因的进化树分析 | 第33-34页 |
| 3.3.4 家蚕卵胚胎发育时期修饰基因时期表达分析 | 第34页 |
| 3.3.5 家蚕5龄 3 天BmNedd8基因组织表达分析 | 第34页 |
| 3.3.6 BmNedd8基因在BmN4-SID I细胞中的定位 | 第34-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 家蚕NEDDylation修饰参与细胞有丝分裂调控 | 第37-55页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第37-42页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第37页 |
| 4.1.2 实验仪器与试剂 | 第37-38页 |
| 4.1.3 试剂配制 | 第38-42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-51页 |
| 4.2.1 LR重组载体的构建 | 第42-46页 |
| 4.2.2 双链RNA的合成 | 第46-47页 |
| 4.2.3 双链RNA干涉 | 第47页 |
| 4.2.4 干涉后基因的半定量检测 | 第47-48页 |
| 4.2.5 干涉后Western blot检测 | 第48-50页 |
| 4.2.6 细胞周期分布检测 | 第50页 |
| 4.2.7 免疫荧光 | 第50-51页 |
| 4.3 结果与分析 | 第51-53页 |
| 4.3.1 NEDDylation修饰基因干涉后分子水平检测 | 第51-52页 |
| 4.3.2 干涉后细胞周期检测 | 第52-53页 |
| 4.3.3 NEDDylation修饰基因干涉后有丝分裂期染色体行为检测 | 第53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 家蚕NEDDylation修饰底物的鉴定 | 第55-69页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第55-57页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第55页 |
| 5.1.2 实验仪器与试剂 | 第55-56页 |
| 5.1.3 试剂配制 | 第56-57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-61页 |
| 5.2.1 Gateway系统构建稳定表达转基因细胞系 | 第57-58页 |
| 5.2.2 免疫沉淀 | 第58-60页 |
| 5.2.3 LC-MS/MS鉴定修饰底物蛋白。 | 第60-61页 |
| 5.3 结果与分析 | 第61-68页 |
| 5.3.1 BmNedd8野生型及其突变型重组载体的构建 | 第61-62页 |
| 5.3.2 BmNedd8野生型及其突变型修饰底物免疫沉淀检测 | 第62-63页 |
| 5.3.3 BmNedd8野生型及其突变型修饰底物的鉴定 | 第63-66页 |
| 5.3.4 家蚕NEDDylation修饰底物蛋白修饰位点分析 | 第66-67页 |
| 5.3.5 家蚕NEDDylation修饰底物蛋白功能分析 | 第67-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-69页 |
| 第六章 综合与结论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 在读期间发表论文及参研课题 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 附表 | 第81-88页 |
