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红树林源白浅灰链霉菌中苯并萘啶化合物生物合成基因簇的克隆及功能分析

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-9页
第一章 前言第9-20页
   ·红树林生态系统第9-11页
     ·红树林概况第9页
     ·红树林生态系统中的微生物类群第9-11页
   ·生物碱简介第11-17页
     ·生物碱定义第11页
     ·生物碱的分类第11-16页
     ·海洋环境中的生物碱第16-17页
   ·萘啶类化合物研究概况第17-18页
   ·目的与意义第18-20页
第二章 材料与方法第20-35页
   ·实验材料第20-27页
     ·菌株第20-21页
     ·质粒第21页
     ·工具酶第21页
     ·主要试剂第21-22页
     ·常用培养基、溶液第22-23页
     ·主要仪器第23-24页
     ·引物合成第24-27页
   ·实验方法第27-35页
     ·链霉菌培养及菌种保藏第27页
     ·分子聚合酶链式反应(PCR)第27-28页
     ·酶切反应第28页
     ·从琼脂糖凝胶中回收DNA 片段:第28页
     ·连接反应第28-29页
     ·转化第29页
     ·菌落PCR 初筛重组子第29页
     ·Alkaline Phosphatase 的去磷酸反应第29-30页
     ·孢子悬液的制备第30页
     ·化转感受态细胞的制备第30页
     ·电转感受态的制备及电转化第30-31页
     ·链霉菌与大肠杆菌的接合转移第31-32页
     ·放线菌总DNA 的少量快速分离第32页
     ·质粒少量制备第32-33页
     ·细菌总RNA 的提取及纯化第33页
     ·反转录PCR(RT-PCR)第33-35页
第三章 结果与讨论第35-82页
   ·基因组文库中生物合成相关基因簇的筛选第35-40页
     ·萘啶类化合物生物合成相关基因的生物信息学分析第35-39页
     ·萘啶类化合物生物合成相关基因簇的筛选及定位第39-40页
   ·bnr 基因簇的转录分析第40-41页
   ·bnr 基因簇的功能分析第41-82页
     ·bnr 基因簇的大片段缺失第41-49页
     ·白浅灰链霉菌MGR072 野生型菌株与大片段缺失突变株的发酵及产物检测第49-53页
     ·基因簇中单个基因bnr1、bnr2、bnr3 的缺失第53-63页
     ·白浅灰链霉菌MGR072 野生型菌株与基因簇中单个基因bnr1、bnr2、bnr3 缺失突变株LMO09B611、LMO09B612、LMO09B613 的发酵及产物检测第63-72页
     ·基因bnr1、bnr2 的回补第72-77页
     ·基因bnr1、bnr2 回补株LMO09B616、LMO09B617 的发酵及产物检测第77-81页
     ·bnr 基因簇在化合物1 生物合成中作用推测第81-82页
第四章 总结与展望第82-84页
   ·主要工作与创新点第82-83页
   ·展望第83-84页
参考文献第84-90页
附录第90-94页
致谢第94-95页
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文第95-97页

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