| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一部分 粟酒裂殖酵母DJ-1同源蛋白的功能研究 | 第12-71页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 乙二醛酶Ⅲ | 第14-17页 |
| 1.1.1 细胞内丙酮醛和乙二醛的来源,作用以及危害 | 第14-15页 |
| 1.1.2 细胞内代谢MG的途径 | 第15-16页 |
| 1.1.3 研究内容、思路和方法 | 第16-17页 |
| 1.2 自噬 | 第17-23页 |
| 1.2.1 什么是自噬 | 第17页 |
| 1.2.2 自噬的分类及功能 | 第17-18页 |
| 1.2.3 自噬发生的过程 | 第18页 |
| 1.2.4 自噬的意义 | 第18-19页 |
| 1.2.5 自噬受到的调控 | 第19页 |
| 1.2.6 DJ-1超家族成员参与自噬的研究现状 | 第19-20页 |
| 1.2.7 研究内容,思路和方法 | 第20-23页 |
| 第二章 酵母中具有乙二醛酶Ⅲ活性的蛋白的鉴定 | 第23-42页 |
| 2.1 材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 溶液与培养基的配制 | 第24-27页 |
| 2.1.3 试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 仪器 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 Top10化转感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.2 pFA6a-kanmx6-Sdj1-flanks重组质粒的构建 | 第28-32页 |
| 2.2.3 sdj1的敲除 | 第32页 |
| 2.2.4 sdj1和hsp3101-3105高表达重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.5 △sdj1和Δhsp3101-3105单基因缺陷菌和多基因缺陷菌的点菌实验 | 第33页 |
| 2.2.6 sdj1和hsp3101-3105高表达回补实验 | 第33页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第33-39页 |
| 2.3.1 Δsdj1菌株的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.2 hsp3101-hsp3103和sdjl的敲除对缺陷菌的丙酮醛耐受性无影响 | 第34-35页 |
| 2.3.3 高表达hsp3101,hsp3102,ScHSP31和EcHsp31增强了野生菌和ΔSpgl01应对α-羰基化合物的能力 | 第35-38页 |
| 2.3.4 高表达hsp3101,hsp3102,hsp3103,hsp3105和sdj1可以增加细胞对H_2O_2的抵抗力 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-42页 |
| 第三章 SpHsp31和Sdj1参与细胞自噬 | 第42-62页 |
| 3.1 材料 | 第43-45页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 溶液和培养基的配置 | 第43-44页 |
| 3.1.3 试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.4 仪器 | 第45页 |
| 3.2 方法 | 第45-52页 |
| 3.2.1 Top10电转感受态细胞的制备 | 第45页 |
| 3.2.2 GFP-Atg8/CFP-Atg8融合蛋白的构建 | 第45-49页 |
| 3.2.3 饥饿处理诱导细胞自噬 | 第49页 |
| 3.2.4 碱裂解法抽提蛋白 | 第49页 |
| 3.2.5 Western blot检测CFP-Atg8融合蛋白的降解 | 第49-51页 |
| 3.2.6 荧光观察 | 第51页 |
| 3.2.7 存活率测定 | 第51-52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-60页 |
| 3.3.1 S.pombe的DJ-1同源基因的缺失削弱了缺陷菌株的热耐受性 | 第52页 |
| 3.3.2 Atg8的N端标记了GFP的菌株的构建 | 第52-54页 |
| 3.3.3 S.pombe的DJ-1同源蛋白的缺失对饥饿诱导的自噬反应无明显影响 | 第54-55页 |
| 3.3.4 hsp3102,hsp3104,hsp3105和sdj1的缺失对稳定期CFP-Atg8融合蛋白的加工造成了影响 | 第55-57页 |
| 3.3.5 S.pombe的DJ-1同源蛋白参与了稳定期Atg8在自噬体组装位点的定位 | 第57-59页 |
| 3.3.6 S.pombe的DJ-1同源蛋白的缺失导致相应缺陷菌在稳定期的存活率下降 | 第59-60页 |
| 3.4 本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 调控SpHsp31和Sdj1稳定期表达的机制探讨 | 第62-69页 |
| 4.1 材料 | 第62-63页 |
| 4.1.1 菌株 | 第62-63页 |
| 4.1.2 溶液和培养基的配制 | 第63页 |
| 4.1.3 试剂 | 第63页 |
| 4.1.4 仪器 | 第63页 |
| 4.2 方法 | 第63-65页 |
| 4.2.1 目的蛋白的提取 | 第63-64页 |
| 4.2.2 目标蛋白浓度的测定 | 第64-65页 |
| 4.3 结果与分析 | 第65-68页 |
| 4.3.1 S.pombe的DJ-1同源基因是CESR基因 | 第65-67页 |
| 4.3.2 稳定期粟酒裂殖酵母DJ-1同源蛋白的表达受Sty1和Atf1的调控 | 第67-68页 |
| 4.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 第五章 第一部分全文总结 | 第69-71页 |
| 第二部分 粟酒裂殖酵母ppr基因缺失引起的细胞絮凝与凋亡的机制研究 | 第71-130页 |
| 第一章 绪论 | 第71-79页 |
| 1.1 PPR蛋白在生物界的分布以及功能 | 第71-73页 |
| 1.2 细胞絮凝 | 第73-74页 |
| 1.2.1 酵母的絮凝及其分类 | 第73页 |
| 1.2.2 引起酵母发生絮凝反应的因素 | 第73-74页 |
| 1.2.3 絮凝的应用 | 第74页 |
| 1.3 细胞凋亡 | 第74-77页 |
| 1.3.1 诱导酵母出现凋亡现象的因素 | 第75-76页 |
| 1.3.2 如何区分细胞的死亡是细胞凋亡还是细胞坏死 | 第76页 |
| 1.3.3 检测细胞凋亡的手段有哪些 | 第76-77页 |
| 1.4 研究内容、思路和方法 | 第77-79页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第77页 |
| 1.4.2 研究思路 | 第77-78页 |
| 1.4.3 研究方法 | 第78-79页 |
| 第二章 ppr基因缺失引起细胞絮凝的机制的初步研究 | 第79-102页 |
| 2.1 材料 | 第79-80页 |
| 2.1.1 菌株 | 第79页 |
| 2.1.2 溶液与培养基的配制 | 第79-80页 |
| 2.1.3 试剂 | 第80页 |
| 2.1.4 仪器 | 第80页 |
| 2.2 方法 | 第80-88页 |
| 2.2.1 Top10化转感受态细胞的制备 | 第80页 |
| 2.2.2 pFA6a-kanmx6-ppr3-flanks重组质粒的构建 | 第80-83页 |
| 2.2.3 ppr3的敲除 | 第83-84页 |
| 2.2.4 不同pH值条件下细胞絮凝程度的测定 | 第84页 |
| 2.2.5 絮凝曲线的测定 | 第84-85页 |
| 2.2.6 S pombe的RNA的提取 | 第85-86页 |
| 2.2.7 cDNA模板的获得 | 第86页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR | 第86-88页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第88-100页 |
| 2.3.1 Appr3菌株的构建 | 第88页 |
| 2.3.2 ppr1,ppr2,ppr3,ppr4,ppr6,ppr8和ppr10的敲除引起缺陷菌凝集 | 第88-89页 |
| 2.3.3 ppr3,ppr4,ppr6和ppr10的敲除引起的细胞凝集是无性絮凝 | 第89-91页 |
| 2.3.4 不同金属离子对细胞絮凝的影响 | 第91-92页 |
| 2.3.5 不同pH对细胞絮凝的影响 | 第92-93页 |
| 2.3.6 Δppr3,Δpp4,Δppr6以及Δppr10通过诱导絮凝因子以及细胞壁重构酶表达量上调实现絮凝 | 第93-96页 |
| 2.3.7 Δppr3,Δppr4,Δppr6和Δppr10的假菌丝生长 | 第96-97页 |
| 2.3.8 Δppr3,Δppr4,Δppr6和Δppr10的盐敏感表型 | 第97-98页 |
| 2.3.9 Δppr3,Δppr4,Δppr6和Δppr10生长曲线和絮凝曲线的测定 | 第98-100页 |
| 2.4 本章小结 | 第100-102页 |
| 第三章 ppr基因缺失引起细胞凋亡的机制研究 | 第102-114页 |
| 3.1 材料 | 第102页 |
| 3.1.1 菌株 | 第102页 |
| 3.1.2 溶液与培养基的配制 | 第102页 |
| 3.1.3 试剂 | 第102页 |
| 3.1.4 仪器 | 第102页 |
| 3.2 方法 | 第102-104页 |
| 3.2.1 存活率测定 | 第102-103页 |
| 3.2.2 野生型菌株yHL6381和ppr基因缺陷菌的点菌实验 | 第103页 |
| 3.2.3 野生型菌株yHL6381和ppr基因缺陷菌细胞核DAPI染色 | 第103页 |
| 3.2.4 野生型菌株yHL6381和ppr基因缺陷菌的线粒体Annexin V-FITC和碘化丙啶染色 | 第103-104页 |
| 3.2.5 野生型菌株yHL6381和ppr基因缺陷菌的线粒体MitoTracker染色 | 第104页 |
| 3.2.6 野生型菌株yHL6381和ppr基因缺陷菌的ROS染色 | 第104页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第104-111页 |
| 3.3.1 部分ppr缺陷菌在稳定期大量死亡 | 第104-107页 |
| 3.3.2 Δppr3,Δppr4,Δppr6,Δppr10的死亡属于细胞凋亡 | 第107-108页 |
| 3.3.3 Δppr3,Δppr4,Δppr6,Δppr10的线粒体受损 | 第108-110页 |
| 3.3.4 Δppr3,Δppr4,Δppr6,Δppr10产生大量活性氧 | 第110-111页 |
| 3.4 本章小结 | 第111-114页 |
| 第四章 利用RNA-Seq技术探究PPR蛋白缺失引起细胞絮凝和凋亡的分子机理 | 第114-127页 |
| 4.1 技术路线 | 第114-115页 |
| 4.1.1 建库测序 | 第114-115页 |
| 4.1.2 分析流程 | 第115页 |
| 4.2 实验步骤 | 第115页 |
| 4.2.1 RNA的提取 | 第115页 |
| 4.2.2 RNA样品质量检测 | 第115页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第115-125页 |
| 4.3.1 数据分析 | 第115-123页 |
| 4.3.2 铁离子异常引起细胞凋亡 | 第123-124页 |
| 4.3.3 Δppr的絮凝表型与凋亡表型之间的联系 | 第124-125页 |
| 4.4 本章小结 | 第125-127页 |
| 第五章 第二部分全文总结 | 第127-130页 |
| 参考文献 | 第130-149页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第149-150页 |
| 致谢 | 第150-152页 |
| 缩略语 | 第152页 |
