| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-38页 |
| 1.1 诱导多能性干细胞 | 第12-17页 |
| 1.1.1 干细胞定义及分类 | 第12页 |
| 1.1.2 体细胞重编程技术 | 第12-14页 |
| 1.1.3 iPS细胞的建立 | 第14-15页 |
| 1.1.4 iPS细胞的发展 | 第15-16页 |
| 1.1.5 iPS细胞的应用价值 | 第16-17页 |
| 1.2 piPS细胞研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.1 piPS细胞的建立 | 第17-18页 |
| 1.2.2 piPS细胞的发展 | 第18页 |
| 1.3 核移植技术研究进展 | 第18-25页 |
| 1.3.1 核移植技术(生殖性克隆)概述 | 第18-20页 |
| 1.3.2 动物转基因技术概述 | 第20-22页 |
| 1.3.3 猪核移植技术发展历史 | 第22页 |
| 1.3.4 猪转基因克隆技术的应用 | 第22-23页 |
| 1.3.5 piPS细胞核移植技术研究 | 第23-25页 |
| 1.4 重编程与表观遗传学 | 第25-36页 |
| 1.4.1 表观遗传学概述 | 第25-31页 |
| 1.4.2 iPS细胞中的表观修饰研究 | 第31-34页 |
| 1.4.3 核移植相关的表观修饰研究 | 第34-36页 |
| 1.5 本课题的研究意义和创新性分析 | 第36-38页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第38-59页 |
| 2.1 实验材料 | 第38-43页 |
| 2.1.1 菌株及细胞系 | 第38页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第38页 |
| 2.1.3 实验试剂与耗材 | 第38-43页 |
| 2.2 实验仪器与设备 | 第43页 |
| 2.3 实验方法 | 第43-57页 |
| 2.3.1 感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第43页 |
| 2.3.2 普通质粒DNA小量提取 | 第43-44页 |
| 2.3.3 去内毒素质粒DNA小量提取 | 第44-45页 |
| 2.3.4 PCR | 第45页 |
| 2.3.5 载体连接与转化 | 第45-46页 |
| 2.3.6 目标DNA片段回收 | 第46-47页 |
| 2.3.7 组织和细胞基因组DNA提取 | 第47页 |
| 2.3.8 DNA甲基化检测 | 第47-49页 |
| 2.3.9 RNA提取 | 第49-50页 |
| 2.3.10 反转录 | 第50页 |
| 2.3.11 荧光定量PCR | 第50-51页 |
| 2.3.12 猪成纤维细胞系的建立 | 第51-52页 |
| 2.3.13 饲养层细胞的制备 | 第52页 |
| 2.3.14 piPS细胞诱导及培养 | 第52页 |
| 2.3.15 猪胎儿成纤维细胞及piPS细胞的电转 | 第52页 |
| 2.3.16 piPS细胞的传代 | 第52-53页 |
| 2.3.17 piPS细胞的冻存与解冻 | 第53页 |
| 2.3.18 piPS细胞单克隆的挑取 | 第53页 |
| 2.3.19 piPS细胞的AP染色 | 第53页 |
| 2.3.20 piPS细胞的免疫荧光染色 | 第53-54页 |
| 2.3.21 piPS细胞畸胎瘤和HE染色实验 | 第54页 |
| 2.3.22 猪卵母细胞的采集和体外成熟 | 第54-55页 |
| 2.3.23 猪孤雌胚胎制备 | 第55页 |
| 2.3.24 体外受精胚胎制备 | 第55页 |
| 2.3.25 核移植胚胎制备 | 第55-57页 |
| 2.3.26 聚合胚胎制备 | 第57页 |
| 2.3.27 胚胎移植 | 第57页 |
| 2.4 实验数据处理分析相关软件 | 第57-59页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第59-90页 |
| 3.1 piPS细胞的诱导和细胞建系 | 第59-63页 |
| 3.1.1 多能性因子载体构建 | 第59页 |
| 3.1.2 piPS细胞的诱导 | 第59-61页 |
| 3.1.3 piPS细胞多能性鉴定 | 第61-62页 |
| 3.1.4 piPS细胞的分化 | 第62-63页 |
| 3.2 piPS细胞的表观重编程研究 | 第63-74页 |
| 3.2.1 piPS细胞中OCT4基因甲基化修饰与内源OCT4基因的表达 | 第63-69页 |
| 3.2.2 piPS细胞中印记基因的表达 | 第69-72页 |
| 3.2.3 piPS细胞的XCI现象 | 第72-74页 |
| 3.3 piPS细胞核移植胚胎的表观重编程研究 | 第74-86页 |
| 3.3.1 piPS细胞核移植胚胎OCT4甲基化修饰与内源OCT4的表达 | 第74-78页 |
| 3.3.2 piPS细胞核移植胚胎中GTL2表达与DNA甲基化 | 第78-80页 |
| 3.3.3 piPS细胞核移植胚胎中XCI | 第80-86页 |
| 3.4 piPS细胞核移植胚胎聚合 | 第86-90页 |
| 3.4.1 未分化piPS细胞核移植胚胎与成纤维细胞核移植胚胎聚合 | 第86-87页 |
| 3.4.2 分化piPS细胞核移植胚胎与成纤维细胞核移植胚胎聚合 | 第87-88页 |
| 3.4.3 聚合胚胎的胚胎移植 | 第88-90页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第90-95页 |
| 4.1 关于本实验piPS细胞诱导体系的讨论 | 第90-91页 |
| 4.2 关于piPS细胞中异常的表观修饰的讨论 | 第91-93页 |
| 4.3 关于piPS细胞核移植胚胎中异常表观修饰的讨论 | 第93-94页 |
| 4.4 关于胚胎聚合的讨论 | 第94-95页 |
| 第五章 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-114页 |
| 附录 | 第114-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 个人简历 | 第123页 |
