| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1.1 热休克蛋白(heat shock protein,HSP)的研究概况 | 第13-21页 |
| 1.1.1 热休克蛋白的种类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 热休克蛋白的结构和功能 | 第14-21页 |
| 1.1.2.1 热休克蛋白的结构 | 第14-16页 |
| 1.1.2.2 热休克蛋白所具有的分子伴侣功能 | 第16-18页 |
| 1.1.2.3 植物的生长发育与热休克蛋白的表达 | 第18-19页 |
| 1.1.2.4 植物的抗逆性与热休克蛋白的表达 | 第19-20页 |
| 1.1.2.5 热休克蛋白对病毒复制的影响 | 第20-21页 |
| 1.1.2.6 热休克蛋白对病毒运动的影响 | 第21页 |
| 1.2 水稻条纹病毒的研究概况 | 第21-26页 |
| 1.2.1 RSV与宿主水稻基因互作研究 | 第23-24页 |
| 1.2.2 RSV编码蛋白的自身互作研究 | 第24-25页 |
| 1.2.3 RSV对寄主水稻和昆虫的影响 | 第25-26页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 第2章 HSP20基因克隆及原核表达 | 第28-42页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 材料 | 第28-29页 |
| 2.2.2 方法 | 第29-35页 |
| 2.2.2.1 设计引物 | 第29页 |
| 2.2.2.2 Trizol法提取植物叶片总RNA | 第29-30页 |
| 2.2.2.3 反转录 | 第30页 |
| 2.2.2.4 基因扩增及纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.2.5 构建克隆载体 | 第31-32页 |
| 2.2.2.5.1 将纯化的目的片段连接T载体 | 第31页 |
| 2.2.2.5.2 连接产物转化大肠杆菌 | 第31-32页 |
| 2.2.2.5.3 鉴定筛选阳性克隆及测序 | 第32页 |
| 2.2.2.5.4 质粒小量提取 | 第32页 |
| 2.2.2.6 原核表达载体pET-OsHSP20的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.2.6.1 双酶切及连接反应 | 第32-33页 |
| 2.2.2.6.2 重组质粒转化大肠杆菌 | 第33页 |
| 2.2.2.7 OsHSP20蛋白表达的诱导 | 第33-34页 |
| 2.2.2.8 Western blot检测表达蛋白 | 第34页 |
| 2.2.2.9 HSP20基因的信息学分析 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-41页 |
| 2.3.1 基因的克隆及信息学分析 | 第35-38页 |
| 2.3.2 原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.3.3 pET-OsHSP20蛋白诱导表达及纯化 | 第39-41页 |
| 2.3.4 Western blot检测表达蛋白 | 第41页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第41-42页 |
| 第3章 HSP20的表达特性分析 | 第42-48页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 材料与方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 材料 | 第42页 |
| 3.2.2 方法 | 第42-45页 |
| 3.2.2.1 设计引物 | 第42-43页 |
| 3.2.2.2 荧光定量检测HSP20含量 | 第43-44页 |
| 3.2.2.2.1 实验材料处理 | 第43-44页 |
| 3.2.2.2.2 荧光定量PCR | 第44页 |
| 3.2.2.3 Western blot检测HSP20蛋白表达量 | 第44-45页 |
| 3.2.2.3.1 植物蛋白的提取 | 第44-45页 |
| 3.2.2.3.2 Western blot检测 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-47页 |
| 3.3.1 热激对HSP20转录水平的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.2 热激对HSP20蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.3 RSV对HSP20转录水平的影响 | 第47页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第47-48页 |
| 第4章 HSP20的自身互作及亚细胞定位分析 | 第48-58页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 材料与方法 | 第48-53页 |
| 4.2.1 材料 | 第48页 |
| 4.2.2 方法 | 第48-53页 |
| 4.2.2.1 设计引物 | 第48-49页 |
| 4.2.2.2 目的基因的扩增与纯化 | 第49-50页 |
| 4.2.2.3 克隆载体的构建 | 第50页 |
| 4.2.2.4 重组载体的构建 | 第50-51页 |
| 4.2.2.5 重组质粒共转化酵母菌株感受态 | 第51页 |
| 4.2.2.6 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| 4.2.2.7 重组质粒转化农杆菌感受态 | 第52页 |
| 4.2.2.8 农杆菌浸润接种 | 第52页 |
| 4.2.2.9 水稻原生质体感受态细胞的制备 | 第52-53页 |
| 4.2.2.10 重组质粒转化水稻原生质体 | 第53页 |
| 4.2.2.11 荧光观察 | 第53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-57页 |
| 4.3.1 HSP20在酵母中的自身互作研究 | 第53-55页 |
| 4.3.2 HSP20的亚细胞定位分析 | 第55-57页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第57-58页 |
| 第5章 HSP20与RSV的互作研究 | 第58-74页 |
| 5.1 引言 | 第58页 |
| 5.2 与HSP20互作的病毒基因筛选 | 第58-60页 |
| 5.2.1 材料与方法 | 第58-60页 |
| 5.2.1.1 材料 | 第58-59页 |
| 5.2.1.2 方法 | 第59-60页 |
| 5.2.1.2.1 设计引物 | 第59页 |
| 5.2.1.2.2 基因筛选及互作验证 | 第59-60页 |
| 5.3 HSP20与RdRp的体内外互作验证 | 第60-66页 |
| 5.3.1 材料与方法 | 第60-66页 |
| 5.3.1.1 材料 | 第60页 |
| 5.3.1.2 方法 | 第60-66页 |
| 5.3.1.2.1 设计引物 | 第60-62页 |
| 5.3.1.2.2 目的基因的扩增与纯化 | 第62-63页 |
| 5.3.1.2.3 克隆载体的构建 | 第63页 |
| 5.3.1.2.4 重组载体的构建 | 第63-64页 |
| 5.3.1.2.5 重组质粒共转化酵母菌株感受态 | 第64页 |
| 5.3.1.2.6 重组质粒转化农杆菌感受态 | 第64页 |
| 5.3.1.2.7 农杆菌浸润接种 | 第64页 |
| 5.3.1.2.8 体外转录和翻译 | 第64-65页 |
| 5.3.1.2.9 Western blot检测表达蛋白 | 第65-66页 |
| 5.3.1.2.10 Pull-down | 第66页 |
| 5.4 结果与分析 | 第66-73页 |
| 5.4.1 HSP20与RdRp在酵母中互作 | 第66-67页 |
| 5.4.2 HSP20与RSV RdRp的互作结构域鉴定 | 第67-69页 |
| 5.4.3 HSP20与RdRp~(1-296)在植物体内的互作验证 | 第69-71页 |
| 5.4.4 HSP20与RdRp~(1-296)在体外的互作验证 | 第71-72页 |
| 5.4.5 HSP20与RdRp~(1-296)的共定位分析 | 第72-73页 |
| 5.5 小结与讨论 | 第73-74页 |
| 第6章 总结和展望 | 第74-76页 |
| 6.1 总结 | 第74-75页 |
| 6.2 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 附录 | 第83-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第95-97页 |
