| 摘要 | 第3-9页 |
| Abstract | 第9-17页 |
| 第1章 前言 | 第24-37页 |
| 1.1 心原性猝死概述 | 第24-26页 |
| 1.2 ERS——良性/恶性？ | 第26-34页 |
| 1.2.1 定义和流行病学 | 第26-27页 |
| 1.2.2 动态变化的电生理特性 | 第27-28页 |
| 1.2.3 ER及其致心律失常的细胞电生理机制 | 第28-31页 |
| 1.2.4 遗传学基础 | 第31-34页 |
| 1.3 L-型钙离子通道突变的致心律失常作用 | 第34-37页 |
| 第2章 心原性猝死大家系临床和尸检分析及遗传学检测 | 第37-87页 |
| 材料与方法 | 第37-69页 |
| 1 临床和尸检分析 | 第37-41页 |
| 1.1 研究对象 | 第37-38页 |
| 1.2 临床资料收集 | 第38页 |
| 1.3 尸检资料收集 | 第38-39页 |
| 1.4 先证者心肌组织苏木精-伊红 ( hematoxylin-eosin, HE)染色 | 第39-41页 |
| 1.5 统计学分析 | 第41页 |
| 2 遗传学检测 | 第41-69页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 2.2 外周静脉血采集 | 第42页 |
| 2.3 外周血白细胞全基因组DNA提取 | 第42-44页 |
| 2.4 基因DNA直接测序 | 第44-69页 |
| 结果 | 第69-82页 |
| 1.临床表现型特征 | 第69-75页 |
| 2.遗传基因型特征 | 第75-82页 |
| 3.遗传型与表现型关联分析 | 第82页 |
| 讨论 | 第82-87页 |
| 第3章 CACNA1C基因突变致心原性猝死相关早期复极的细胞电生理机制及其药物干预探讨 | 第87-134页 |
| 材料与方法 | 第87-121页 |
| 1.组织标本免疫组化 | 第87-90页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第87页 |
| 1.2 主要试剂及其配制 | 第87-89页 |
| 1.3 组织免疫操作方法及步骤 | 第89-90页 |
| 2.定点突变 | 第90-99页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第90-91页 |
| 2.2 主要试剂及其配制 | 第91-93页 |
| 2.3 定点突变操作方法及步骤 | 第93-99页 |
| 3.HEK293细胞培养及瞬时转染 | 第99-104页 |
| 3.1 主要仪器设备 | 第99-100页 |
| 3.2 主要试剂及其配制 | 第100-101页 |
| 3.3 细胞培养操作方法及步骤 | 第101-103页 |
| 3.4 细胞瞬时转染操作方法及步骤 | 第103-104页 |
| 4.RNA提取及实时荧光定量PCR（Quantitative Real time PCR, qRT-PCR） | 第104-108页 |
| 4.1 主要仪器设备 | 第104页 |
| 4.2 主要试剂及其配制 | 第104-105页 |
| 4.3 细胞总RNA提取 | 第105-106页 |
| 4.4 逆转录PCR | 第106页 |
| 4.5 qRT-PCR | 第106-108页 |
| 5.蛋白质提取及蛋白免疫印迹（Western Blot） | 第108-115页 |
| 5.1 主要仪器设备 | 第108页 |
| 5.2 主要试剂及其配制 | 第108-112页 |
| 5.3 细胞总蛋白质提取 | 第112页 |
| 5.4 细胞膜蛋白与浆蛋白提取 | 第112-113页 |
| 5.5 蛋白质浓度测定 | 第113页 |
| 5.6 SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳 | 第113-114页 |
| 5.7 蛋白质转印 | 第114页 |
| 5.8 蛋白质免疫反应及显色曝光 | 第114-115页 |
| 6.细胞免疫荧光 | 第115-116页 |
| 6.1 主要仪器设备 | 第115页 |
| 6.2 主要试剂及其配制 | 第115-116页 |
| 6.3 细胞免疫荧光操作方法及步骤 | 第116页 |
| 7.全细胞膜片钳细胞电生理分析及药物筛选 | 第116-120页 |
| 7.1 主要仪器设备 | 第116-117页 |
| 7.2 主要试剂及其配制 | 第117-119页 |
| 7.3 细胞电生理操作方法步骤及数据记录与分析 | 第119-120页 |
| 8.统计学分析 | 第120-121页 |
| 结果 | 第121-130页 |
| 1.CACNA1C-Q1916R突变质粒成功诱导 | 第121页 |
| 2.CACNA1C-Q1916R突变致Cav1.2 定位表达水平降低但转运能力正常 | 第121-126页 |
| 2.1 先证者心肌组织突变Cav1.2 蛋白表达水平降低 | 第121-123页 |
| 2.2 HEK293细胞中突变Cav1.2 mRNA和蛋白表达水平降低 | 第123-125页 |
| 2.3 HEK293细胞中突变Cav1.2 定位及转运能力正常 | 第125-126页 |
| 3.CACNA1C-Q1916R突变致LTCCs电生理功能改变及治疗药物筛选 | 第126-130页 |
| 3.1 HEK293细胞瞬时转染效率 | 第126页 |
| 3.2 突变Cav1.2 降低LTCCs电流密度 | 第126页 |
| 3.3 睾酮对突变Cav1.2 功能的影响 | 第126-127页 |
| 3.4 异丙肾上腺素和奎尼丁对突变 Cav1.2 功能的影响 | 第127-130页 |
| 讨论 | 第130-133页 |
| 结论 | 第133-134页 |
| 全文总结 | 第134-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-146页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第146-148页 |
| 综述一 心脏钙离子通道疾病 | 第148-155页 |
| 参考文献 | 第153-155页 |
| 综述二 心原性猝死患者遗传检测的管理 | 第155-162页 |
| 参考文献 | 第160-162页 |
