| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-27页 |
| ·猪的转基因技术 | 第12-13页 |
| ·动物基因组编辑新技术 | 第13-24页 |
| ·基因组编辑技术的原理 | 第13-16页 |
| ·类转录激活因子效应物核酸酶 | 第16-18页 |
| ·CRISPR/Cas系统 | 第18-22页 |
| ·TALEN和CRISPR/Cas系统的对比 | 第22-24页 |
| ·基因组编辑新技术在转基因猪中的应用进展 | 第24页 |
| ·安全港位点的研究进展 | 第24-26页 |
| ·展望 | 第26-27页 |
| 第二章 猪耳成纤维细胞系的建立和电转染条件的优化 | 第27-39页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·实验动物和质粒 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·溶液配制 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-35页 |
| ·细胞培养操作 | 第29-30页 |
| ·细胞冻存与复苏 | 第30-31页 |
| ·成纤维细胞培养的形态学观察 | 第31页 |
| ·成纤维细胞生长曲线的绘制 | 第31页 |
| ·质粒pEGFP-C1 的提取和鉴定 | 第31-34页 |
| ·pEGFP-C1 转染猪耳成纤维细胞 | 第34-35页 |
| ·结果 | 第35-37页 |
| ·成纤维细胞原代培养观察结果 | 第35页 |
| ·细胞生长曲线 | 第35-36页 |
| ·pEGFP-C1 的质量检测和酶切鉴定 | 第36页 |
| ·pEGFP-C1 转染猪耳成纤维细胞条件的探索 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·关于细胞培养 | 第37页 |
| ·关于电转染条件的优化 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第三章TALEN和CRISPR/Cas9 系统对CCR5 基因敲除的研究 | 第39-53页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·载体和试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·引物合成和测序 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-46页 |
| ·确定靶基因以及打靶位点 | 第39-40页 |
| ·TALEN介导的CCR5 基因敲除的研究 | 第40-43页 |
| ·CRISPR/Cas9 介导的CCR5 基因敲除的研究 | 第43-46页 |
| ·结果 | 第46-51页 |
| ·TALEN质粒构建与鉴定 | 第46-50页 |
| ·TALEN质粒转染猪耳成纤维细胞的转染效率观察 | 第50页 |
| ·TALEN打靶结果的pool验证 | 第50-51页 |
| ·CRISPR打靶结果的pool验证 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第四章 上海梅山猪封闭群内源性逆转录病毒的检测及分析 | 第53-59页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·实验动物 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53-54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-56页 |
| ·样品采集和细胞培养与保存 | 第54页 |
| ·基因组DNA提取 | 第54页 |
| ·总RNA提取与反转录 | 第54页 |
| ·引物设计与合成 | 第54-55页 |
| ·PCR反应 | 第55页 |
| ·RT-PCR反应 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-57页 |
| ·PCR检测结果 | 第56页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录 TALEN模块标准序列及序列比对结果 | 第68-73页 |
| A1 TALEN模块标准序列 | 第68-69页 |
| A2 各条TALEN臂的tblast结果 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
| 在学期间发表的文章 | 第74页 |
