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α-酮戊二酸工程菌构建及发酵条件控制

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
1 前言第11-24页
   ·α-酮戊二酸的理化性质第11页
   ·α-酮戊二酸的应用第11-12页
   ·α-酮戊二酸的生产概况第12-14页
     ·α-酮戊二酸的生产方法第12-13页
     ·发酵法生产α-酮戊二酸的历史第13页
     ·α-酮戊二酸发酵生产菌株第13-14页
   ·α-酮戊二酸的合成途径及代谢调控机制第14-17页
     ·α-酮戊二酸的合成途径第14-15页
     ·α-酮戊二酸合成的代谢调控机制第15-17页
   ·α -酮戊二酸生产菌的生化特性及育种思路第17-18页
     ·α-酮戊二酸生产菌具备的生化特征第17页
     ·α-酮戊二酸生产菌的育种思路第17-18页
   ·α-酮戊二酸的发酵优化策略第18-21页
     ·α-酮戊二酸生产的培养基第18-20页
     ·α-酮戊二酸发酵条件优化第20-21页
   ·α-酮戊二酸的测定方法第21-22页
   ·论文立题依据及主要研究内容第22-24页
     ·立题依据第22-23页
     ·主要研究内容第23-24页
2 材料与方法第24-42页
   ·实验材料第24-30页
     ·菌株与质粒第24-25页
     ·主要仪器第25-26页
     ·主要试剂第26-28页
     ·主要溶液第28-29页
     ·主要培养基第29-30页
   ·实验方法第30-39页
     ·质粒提取第30页
     ·谷氨酸棒状杆菌基因组的提取第30-31页
     ·PCR扩增第31-34页
     ·DNA限制性内切酶酶切第34页
     ·琼脂糖凝胶电泳第34页
     ·DNA的回收纯化第34-35页
     ·连接与转化第35-36页
     ·感受态细胞制备第36-37页
     ·重组质粒的构建第37页
     ·转化子鉴定第37-38页
     ·目的基因测序第38页
     ·重组质粒电转化及基因缺失菌株的筛选第38-39页
   ·发酵培养方法第39页
     ·斜面活化培养第39页
     ·摇瓶与发酵罐的种子培养第39页
     ·摇瓶补料分批发酵第39页
     ·发酵罐补料分批发酵第39页
   ·分析方法第39-42页
     ·菌体干重的计算第39-40页
     ·培养液pH的测定第40页
     ·残糖的测定第40页
     ·有机酸的测定第40页
     ·氨基酸的测定第40-41页
     ·数据分析第41-42页
3 结果与讨论第42-63页
   ·菌株GDK-9△gdh△gdhA的构建及发酵实验第42-47页
     ·重组片段△gdhA的构建第42-43页
     ·重组质粒pK18mobsacB△gdhA的构建第43-44页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA的构建第44-45页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA和GDK-9△gdh的摇瓶发酵实验第45-46页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA和GDK-9△gdh的5L发酵罐发酵实验第46-47页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA的发酵结果讨论第47页
   ·alaT基因敲除菌株GDK-9△gdh△alaT的构建及发酵实验第47-50页
     ·重组片段△alaT的构建第47-48页
     ·重组质粒pK18mobsacB△alaT的构建第48页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△alaT的构建第48-49页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△alaT的摇瓶发酵实验第49页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△alaT的5 L发酵罐发酵实验第49页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△alaT的发酵发酵结果讨论第49-50页
   ·菌株GDK-9△gdhAgdhA△gogat的构建及发酵实验第50-52页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA△gogat的构建第50-51页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA△gogat的摇瓶发酵实验第51页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA△gogat的5L发酵罐发酵实验第51-52页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA△gogat的发酵结果讨论第52页
   ·菌株GDK-9△gdh△aceA的构建第52-54页
     ·重组片段△aceA的构建第52-53页
     ·重组质粒pK18mobsacB△aceA的构建第53页
     ·重组菌GDK-9△gdh△aceA的构建第53页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△aceA的摇瓶发酵实验第53-54页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△aceA的5L发酵罐发酵实验第54页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△aceA的发酵结果总结第54页
   ·过表达菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19prpc和空质粒菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19的构建第54-57页
     ·重组质粒pXMJ19prpc的构建第55页
     ·重组质粒pXMJ19prpc及空质粒pXMJ19的电转化及重组菌株的筛选第55-56页
     ·过表达菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19prpc和空质粒菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19的摇瓶发酵实验第56页
     ·过表达菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19prpc和空质粒菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19的5L发酵罐发酵实验第56-57页
     ·基因prpc过表达菌株的发酵实验结果讨论第57页
   ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA的双阶段pH和生物素发酵控制第57-63页
     ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA的双阶段pH发酵控制实验第58页
     ·在发酵初期的生物素控制实验第58-60页
     ·在发酵中后期添加生物素对发酵产α-KG的影响第60-62页
     ·双阶段pH和生物素控制条件下的发酵过程第62-63页
4 结论第63-65页
5 展望第65-66页
6 参考文献第66-73页
7 攻读研究生期间论文发表情况第73-74页
8 致谢第74页

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