| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| ·α-酮戊二酸的理化性质 | 第11页 |
| ·α-酮戊二酸的应用 | 第11-12页 |
| ·α-酮戊二酸的生产概况 | 第12-14页 |
| ·α-酮戊二酸的生产方法 | 第12-13页 |
| ·发酵法生产α-酮戊二酸的历史 | 第13页 |
| ·α-酮戊二酸发酵生产菌株 | 第13-14页 |
| ·α-酮戊二酸的合成途径及代谢调控机制 | 第14-17页 |
| ·α-酮戊二酸的合成途径 | 第14-15页 |
| ·α-酮戊二酸合成的代谢调控机制 | 第15-17页 |
| ·α -酮戊二酸生产菌的生化特性及育种思路 | 第17-18页 |
| ·α-酮戊二酸生产菌具备的生化特征 | 第17页 |
| ·α-酮戊二酸生产菌的育种思路 | 第17-18页 |
| ·α-酮戊二酸的发酵优化策略 | 第18-21页 |
| ·α-酮戊二酸生产的培养基 | 第18-20页 |
| ·α-酮戊二酸发酵条件优化 | 第20-21页 |
| ·α-酮戊二酸的测定方法 | 第21-22页 |
| ·论文立题依据及主要研究内容 | 第22-24页 |
| ·立题依据 | 第22-23页 |
| ·主要研究内容 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-42页 |
| ·实验材料 | 第24-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26-28页 |
| ·主要溶液 | 第28-29页 |
| ·主要培养基 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-39页 |
| ·质粒提取 | 第30页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌基因组的提取 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增 | 第31-34页 |
| ·DNA限制性内切酶酶切 | 第34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| ·DNA的回收纯化 | 第34-35页 |
| ·连接与转化 | 第35-36页 |
| ·感受态细胞制备 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的构建 | 第37页 |
| ·转化子鉴定 | 第37-38页 |
| ·目的基因测序 | 第38页 |
| ·重组质粒电转化及基因缺失菌株的筛选 | 第38-39页 |
| ·发酵培养方法 | 第39页 |
| ·斜面活化培养 | 第39页 |
| ·摇瓶与发酵罐的种子培养 | 第39页 |
| ·摇瓶补料分批发酵 | 第39页 |
| ·发酵罐补料分批发酵 | 第39页 |
| ·分析方法 | 第39-42页 |
| ·菌体干重的计算 | 第39-40页 |
| ·培养液pH的测定 | 第40页 |
| ·残糖的测定 | 第40页 |
| ·有机酸的测定 | 第40页 |
| ·氨基酸的测定 | 第40-41页 |
| ·数据分析 | 第41-42页 |
| 3 结果与讨论 | 第42-63页 |
| ·菌株GDK-9△gdh△gdhA的构建及发酵实验 | 第42-47页 |
| ·重组片段△gdhA的构建 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pK18mobsacB△gdhA的构建 | 第43-44页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA的构建 | 第44-45页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA和GDK-9△gdh的摇瓶发酵实验 | 第45-46页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA和GDK-9△gdh的5L发酵罐发酵实验 | 第46-47页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA的发酵结果讨论 | 第47页 |
| ·alaT基因敲除菌株GDK-9△gdh△alaT的构建及发酵实验 | 第47-50页 |
| ·重组片段△alaT的构建 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pK18mobsacB△alaT的构建 | 第48页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△alaT的构建 | 第48-49页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△alaT的摇瓶发酵实验 | 第49页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△alaT的5 L发酵罐发酵实验 | 第49页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△alaT的发酵发酵结果讨论 | 第49-50页 |
| ·菌株GDK-9△gdhAgdhA△gogat的构建及发酵实验 | 第50-52页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA△gogat的构建 | 第50-51页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA△gogat的摇瓶发酵实验 | 第51页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA△gogat的5L发酵罐发酵实验 | 第51-52页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA△gogat的发酵结果讨论 | 第52页 |
| ·菌株GDK-9△gdh△aceA的构建 | 第52-54页 |
| ·重组片段△aceA的构建 | 第52-53页 |
| ·重组质粒pK18mobsacB△aceA的构建 | 第53页 |
| ·重组菌GDK-9△gdh△aceA的构建 | 第53页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△aceA的摇瓶发酵实验 | 第53-54页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△aceA的5L发酵罐发酵实验 | 第54页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△aceA的发酵结果总结 | 第54页 |
| ·过表达菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19prpc和空质粒菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19的构建 | 第54-57页 |
| ·重组质粒pXMJ19prpc的构建 | 第55页 |
| ·重组质粒pXMJ19prpc及空质粒pXMJ19的电转化及重组菌株的筛选 | 第55-56页 |
| ·过表达菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19prpc和空质粒菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19的摇瓶发酵实验 | 第56页 |
| ·过表达菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19prpc和空质粒菌株GDK-9△gdh△aceApXMJ19的5L发酵罐发酵实验 | 第56-57页 |
| ·基因prpc过表达菌株的发酵实验结果讨论 | 第57页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA的双阶段pH和生物素发酵控制 | 第57-63页 |
| ·重组菌株GDK-9△gdh△gdhA的双阶段pH发酵控制实验 | 第58页 |
| ·在发酵初期的生物素控制实验 | 第58-60页 |
| ·在发酵中后期添加生物素对发酵产α-KG的影响 | 第60-62页 |
| ·双阶段pH和生物素控制条件下的发酵过程 | 第62-63页 |
| 4 结论 | 第63-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-73页 |
| 7 攻读研究生期间论文发表情况 | 第73-74页 |
| 8 致谢 | 第74页 |
