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拟南芥RING型锌指蛋白NCA1参与调控过氧化氢酶活性的研究

摘要第1-5页
Abstract第5-6页
目录第6-9页
缩略词第9-11页
第一章 文献综述第11-28页
   ·碱胁迫研究进展第11-15页
     ·土壤盐碱化与碱胁迫第11-13页
     ·土壤pH对植物的生理影响第13-15页
   ·锌指蛋白的研究进展第15-20页
     ·C2H2型(TFⅢA)锌指蛋白第15-16页
     ·C3HC4型(RING)锌指蛋白第16-20页
   ·活性氧的产生与清除第20-27页
     ·植物体内活性氧的产生第20-21页
     ·植物体内活性氧的清除第21-26页
     ·过氧化氢酶参与非生物胁迫响应第26-27页
   ·本研究的目的和意义第27-28页
第二章 实验材料和方法第28-47页
   ·实验材料第28-29页
     ·植物材料第28页
     ·常用菌株和载体第28页
     ·酶和试剂第28页
     ·主要实验仪器第28-29页
   ·常用培养基及溶液的配置第29-31页
     ·常用培养基及溶液第29-30页
     ·免疫印迹相关溶液第30页
     ·重组蛋白纯化相关溶液第30页
     ·原生质体转化相关溶液第30-31页
     ·分离过氧化物酶体相关溶液第31页
   ·实验方法第31-44页
     ·植物培养条件第31页
     ·胁迫处理实验第31-32页
     ·叶绿素含量测定第32页
     ·实时荧光定量PCR第32-33页
     ·质粒构建及转基因第33-36页
     ·原生质体转化第36-37页
     ·亚细胞定位及双分子荧光互补实验第37页
     ·免疫印迹(Western blot)第37-38页
     ·免疫共沉淀第38-39页
     ·过氧化氢含量测定第39页
     ·过氧化氢酶活性测定第39-40页
     ·分离过氧化物酶体第40-42页
     ·分子筛第42页
     ·重组蛋白的表达与纯化第42-43页
     ·体外互作实验第43页
     ·ICP-AES第43页
     ·分子伴侣活性检测第43-44页
   ·引物第44-47页
     ·构建质粒引物第44-45页
     ·RT-PCR引物第45-47页
第三章 结果与分析第47-83页
   ·碱胁迫突变体的筛选与基因克隆第47-50页
   ·NCA1基因的功能分析第50-51页
     ·NCA1基因的表达模式第50页
     ·NCA1蛋白的亚细胞定位第50-51页
   ·nca1-3对多种非生物胁迫敏感第51-54页
   ·NCA1与过氧化氢酶在细胞质中相互作用第54-63页
   ·NCA1激活过氧化氢酶第63-71页
     ·NCA1不影响CAT的亚细胞定位第64-65页
     ·NCA1对CAT没有泛素化修饰第65-66页
     ·NCA1能够激活CAT活性第66-68页
     ·NCA1对CAT的激活作用不受碱胁迫影响第68-69页
     ·NCA1影响细胞质及过氧化物酶体中的CAT活性第69-71页
   ·NCA1具有分子伴侣活性第71-72页
   ·定位于过氧化物酶体的NCA1能够恢复nca1-3突变体的表型第72-74页
   ·NCA1在体外与CAT2蛋白1:1结合第74-77页
   ·NCA1与CAT2相互作用的机制第77-79页
   ·锌指结构保守氨基酸突变的NCA1不能恢复nca1-3突变体的表型第79-83页
第四章 讨论与结论第83-87页
   ·分析与讨论第83-86页
     ·nca1-3对除mannitol外的多种胁迫敏感第84页
     ·NCAl在细胞质中与CAT相互作用激活CAT第84-85页
     ·NCA1作为分子伴侣蛋白维持CAT的折叠状态第85页
     ·锌指蛋白与CAT的关系第85-86页
   ·小结第86-87页
参考文献第87-96页
致谢第96-97页
个人简历第97页

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