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IBDV毒力分子机制研究及反向遗传操作系统的建立

摘要第1-4页
ABSTRACT第4-9页
缩略词表第9-10页
第一章 引言第10-22页
   ·传染性法氏囊病概况第10页
   ·IBDV的基本特性第10-12页
     ·病毒的分类和形态第10-11页
     ·血清型第11页
     ·理化特性第11页
     ·生物学特性第11-12页
     ·抵抗力第12页
   ·IBDV基因组结构第12-13页
   ·IBDV的编码蛋白及其功能第13-15页
     ·VP1 蛋白第13页
     ·VP2 蛋白第13-14页
     ·VP3 蛋白第14页
     ·VP4 蛋白第14页
     ·VP5 蛋白第14-15页
   ·IBDV的培养特性第15-16页
     ·病毒在鸡胚上培养第15页
     ·病毒在细胞上培养第15-16页
   ·IBDV感染性克隆技术研究进展第16-17页
   ·流行病学第17-19页
     ·分布区域第17页
     ·宿主第17-18页
     ·传播媒介第18页
     ·潜伏期和临床症状第18-19页
     ·发病率和死亡率第19页
   ·IBD的诊断方法第19-20页
     ·病毒的分离第19页
     ·血清学和免疫学诊断方法第19-20页
     ·分子生物学诊断技术第20页
   ·IBD的防治第20-21页
   ·目的和意义第21-22页
第二章vvIBDV毒力分子机制及进化研究第22-36页
   ·前言第22页
   ·材料和方法第22-27页
     ·毒株、SPF鸡第22页
     ·菌株、载体和主要试剂第22页
     ·主要仪器第22-23页
     ·致病性试验第23页
     ·VP2 序列测定第23-26页
     ·VP2 同源性分析和进化树构建第26-27页
   ·结果第27-33页
     ·致病性试验第27页
     ·VP2 扩增结果第27-28页
     ·VP2 高变区的分子特征第28页
     ·VP2 基因同源性比对与进化树分析第28-33页
   ·讨论第33-35页
     ·vvIBDV的毒力位点第33-34页
     ·VP2 氨基酸水平同源性和进化树分析第34-35页
   ·小结第35-36页
第三章IBDV B87 不同鸡胚代次毒株毒力和细胞嗜性差异的分子机制研究第36-44页
   ·前言第36页
   ·材料和方法第36-37页
     ·毒株、SPF鸡和鸡胚第36页
     ·菌株、载体和主要试剂第36页
     ·E2, E6 VP2 序列测定第36页
     ·E2, E6 在CEF上的增殖第36-37页
     ·E2, E6 对SPF鸡的安全性比较第37页
   ·结果第37-41页
     ·E2, E6 VP2 序列比较第37-38页
     ·E2, E6 在CEF上的增殖情况第38页
     ·E2, E6 对SPF鸡的安全性比较第38-41页
   ·讨论第41-43页
     ·毒力差异的分子机制第41-42页
     ·细胞嗜性差异的分子机制第42-43页
   ·小结第43-44页
第四章IBDV B87 株感染性克隆的初步建立第44-61页
   ·引言第44页
   ·材料和方法第44-53页
     ·鸡胚、毒株、菌株和载体第44页
     ·主要试剂第44-45页
     ·仪器设备第45页
     ·病毒的增殖和浓缩第45页
     ·c DNA全长的获得第45-46页
     ·c DNA与T载体连接并鉴定第46-47页
     ·引入核酶序列和酶切位点第47-49页
     ·连接真核表达载体pCAGGS第49-51页
     ·病毒拯救第51-53页
   ·结果第53-57页
     ·A, B片段RT-PCR的结果第53页
     ·pClone EZ-TOPO-A,B重组质粒的鉴定第53-54页
     ·多重PCR法引入核酶和酶切位点第54页
     ·真核表达载体的酶切鉴定结果第54-55页
     ·构建的真核表达载体测序结果第55-56页
     ·间接免疫荧光检测结果第56页
     ·观察细胞病变第56页
     ·RT-PCR检测结果第56-57页
     ·病毒拯救结果第57页
   ·讨论第57-60页
     ·影响病毒拯救效率的因素第57-58页
     ·判断病毒拯救成功与否的指标第58-59页
     ·本试验构建方法的优点和缺点第59页
     ·未成功拯救出病毒的原因分析和下一步探索第59-60页
   ·小结第60-61页
第五章 结论第61-62页
参考文献第62-69页
致谢第69-70页
附录Ⅰ第70-74页
附录Ⅱ第74-75页
个人简历第75页

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