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转基因调控柑橘类胡萝卜素积累的细胞学和代谢研究

目录第1-8页
摘要第8-11页
Abstract第11-15页
縮略词表第15-17页
第一章 前言第17-41页
 1 课题的提出第17-18页
 2 前人研究进展第18-39页
   ·植物类胡萝卜素研究进展第18-37页
     ·类胡萝卜素概述第18-19页
     ·植物类胡萝卜素的生物合成与转录调控第19-24页
     ·植物类胡萝卜素的降解第24-26页
     ·类胡萝卜素与质体发育第26-29页
     ·植物类胡萝卜素代谢工程调控第29-35页
     ·柑橘果实类胡萝卜素研究进展第35-37页
   ·植物离体细胞系的应用第37-38页
   ·现代柑橘果实品质改良技术与进展第38-39页
 3 本研究的目的和内容第39-41页
第二章 转CrtB和DSM2基因调控柑橘胚性愈伤组织类胡萝卜素积累的研究第41-80页
 1 引言第41-42页
 2 材料与方法第42-54页
   ·实验材料第42-44页
   ·实验方法第44-54页
     ·遗传转化第44页
     ·DNA提取第44-45页
     ·PCR分析第45-46页
     ·Sourthem杂交分析第46-48页
     ·抗体制备第48-49页
     ·蛋白提取与Western杂交分析第49-50页
     ·倍性分析第50-51页
     ·类胡萝卜素分析第51-52页
     ·细胞学分析第52页
     ·RNA提取与基因表达分析第52-53页
     ·统计分析第53-54页
 3 结果与分析第54-74页
   ·类胡萝卜素代谢细胞模型(ECMs)的创制及其表型特征第54页
   ·ECMs的倍性特征第54-55页
   ·ECMs的T-DNA拷贝数分析第55页
   ·ECMs中的CrtB蛋白表达量分析第55-56页
   ·ECMs的类胡萝卜素积累特征第56-61页
   ·光照对ECMs中类胡萝卜素积累的影响第61-62页
   ·高温对ECMs中类胡萝卜素积累的影响第62-63页
   ·ECMs中类胡萝卜素积累的不稳定性第63页
   ·成熟柑橘有色层的类胡萝卜素积累特征第63-64页
   ·ECMs中类胡萝卜素积累结构的光镜观察第64-66页
   ·ECMs中类胡萝卜素积累结构的超微观察第66-67页
   ·成熟柑橘有色层的类胡萝卜素积累结构第67-69页
   ·两个叶绿体特征蛋白的Western杂交分析第69页
   ·异戊二烯和胡萝卜素代谢相关基因在愈伤和成熟有色层组织中的表达特征第69-73页
   ·CrtB/DSM2共表达细胞系的创制及其特征分析第73-74页
 4 讨论第74-79页
   ·ECMs中类胡萝卜素积累模式的形成原因第75-77页
   ·ECMs中类胡萝卜素存储结构的特征第77-78页
   ·ECMs中类胡萝卜素的降解机制第78页
   ·ECMs同成熟果实有色层间类胡萝卜素积累差异的转录解释第78-79页
 5 本章小结第79-80页
第三章 类胡萝卜素积累对质体发育和代谢的影响第80-108页
 1. 引言第80-81页
 2. 材料与方法第81-85页
   ·实验材料第81页
   ·研究方法第81-85页
     ·淀粉含量分析第81-82页
     ·淀粉粒分离纯化以及扫描电镜观察第82页
     ·饥饿处理与细胞学观察第82-83页
     ·糖酸含量分析第83页
     ·RNA提取与基因表达分析第83页
     ·芯片分析第83-84页
     ·ABA含量分析第84页
     ·活性氧分析第84-85页
     ·氧化还原处理第85页
     ·根癌农杆菌介导苹果愈伤的遗传转化和分析第85页
 3 结果与分析第85-102页
   ·ECMs中的淀粉含量以及淀粉粒特征第85-87页
   ·糖饥饿条件下ECMs中质体形态特征第87-88页
   ·ECMs及其野生型中有机酸和可溶性糖含量第88-89页
   ·类胡萝卜素积累对愈伤转录谱的影响第89-94页
   ·ECMs中ABA的含量变化第94-95页
   ·ECMs中的ROS水平第95-96页
   ·ROS与类胡萝卜素消解的相关性分析第96-97页
   ·细胞氧化还原状态同淀粉含量的相关性分析第97-98页
   ·类胡萝卜素对苹果愈伤组织中花青素合成的影响第98-102页
 4. 讨论第102-107页
   ·类胡萝卜素积累与逆境相关基因响应第102-103页
   ·ECMs中的ABA含量特征第103页
   ·类胡萝卜素积累改变细胞的氧化还原状态第103-104页
   ·类胡萝卜素积累改变质体发育第104-105页
   ·类胡萝卜素积累调控淀粉代谢第105-106页
   ·类胡萝卜素积累负调控花青素代谢第106-107页
 5 本章小结第107-108页
第四章 转CrtB基因早实枳和山金柑的再生和类胡萝卜素积累特征研究第108-119页
 1. 引言第108页
 2. 材料与方法第108-109页
   ·实验材料第108页
   ·研究方法第108-109页
     ·遗传转化与材料培养第108-109页
     ·ABA含量检测第109页
     ·细胞学观察第109页
 3. 结果与分析第109-115页
   ·转基因早实枳的获得与表型分析第109-110页
   ·转基因山金柑的获得与表型分析第110-111页
   ·叶龄与ABA的含量第111页
   ·转基因山金柑中的质体特征第111-114页
   ·成熟果实中的类胡萝卜素积累特征以及有色体观察第114-115页
 4. 讨论第115-118页
   ·转基因植株中类胡萝卜素的组织特异性积累第116-117页
   ·类胡萝卜素积累对质体发育的影响第117-118页
   ·组成型表达CrtB基因影响叶片衰老和株型第118页
 5 本章小结第118-119页
第五章 花药诱导获得红夏橙DH愈伤系并用于LCYB1和LCYE基因的等位多态性分析第119-127页
 1 引言第119-120页
 2 材料和方法第120-121页
   ·实验材料第120页
   ·实验方法第120-121页
     ·花药培养第120页
     ·倍性分析第120页
     ·DNA提取第120页
     ·SSR分析第120-121页
     ·LCYB1基因的CAPS分析第121页
     ·LCYE基因片段测序分析第121页
 3 结果与分析第121-125页
   ·花药培养获得愈伤、胚状体以及再生芽第121-122页
   ·愈伤以及胚状体的倍性分析第122-123页
   ·SSR分析第123-124页
   ·DH愈伤系应用于LCYB1和LCYE基因的等位多态性分析第124-125页
 4 讨论第125-127页
第六章 总讨论与未来研究展望第127-130页
参考文献第130-153页
附录Ⅰ第153-156页
附录Ⅱ第156-159页
附录Ⅲ 图版第159-162页
附录Ⅳ 各种胚性愈伤组织中的类胡萝卜素组成(暗培养条件)第162-164页
附录Ⅴ 基因芯片杂交数据第164-169页
附录Ⅵ 博士期间发表论文第169-170页
致谢第170-171页

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