| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-23页 |
| ·木质纤维素类生物质资源生产燃料乙醇 | 第10-12页 |
| ·木质纤维素燃料乙醇的生产及其意义 | 第10-11页 |
| ·酿酒酵母做为乙醇生产菌种的优势 | 第11-12页 |
| ·微生物工业育种的主要手段 | 第12-14页 |
| ·自然选育及诱变育种 | 第12页 |
| ·基因重组育种 | 第12-13页 |
| ·基因工程育种 | 第13-14页 |
| ·原生质体融合技术构建酿酒酵母木糖乙醇代谢工程菌 | 第14-16页 |
| ·原生质体融合的筛选标记 | 第14-15页 |
| ·原生质体融合技术在酿酒酵母工程菌构建中的应用 | 第15-16页 |
| ·基因工程技术构建酿酒酵母木糖乙醇代谢工程菌 | 第16-19页 |
| ·引入木糖代谢途径 | 第16-18页 |
| ·木糖代谢流下游的疏通 | 第18-19页 |
| ·基因工程菌株的应用 | 第19页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| ·本课题研究的目的 | 第19-20页 |
| ·本课题研究的意义 | 第20页 |
| ·本研究的主要技术路线 | 第20-22页 |
| ·课题资助名称 | 第22-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-56页 |
| ·试验材料 | 第23-33页 |
| ·供试菌株及质粒载体 | 第23-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增引物 | 第26-27页 |
| ·主要生物化学及分子生物学试剂 | 第27-28页 |
| ·主要生化试剂及缓冲液配制方法 | 第28-31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31-33页 |
| ·试验方法 | 第33-56页 |
| ·原生质体融合双亲株W5及20335特性初探 | 第33-34页 |
| ·W5及20335原生质体制备及再生 | 第34-35页 |
| ·W5及20335原生质体灭活处理 | 第35-36页 |
| ·原生质体融合及融合子的检出 | 第36页 |
| ·融合子木糖、葡萄糖单碳源发酵试验 | 第36页 |
| ·融合子木糖、葡萄糖混合碳源发酵试验 | 第36-37页 |
| ·G418对菌株W5及Ecoli DH5α最低抑菌浓度 | 第37页 |
| ·Blasticidin对菌株W5最低抑菌浓度 | 第37页 |
| ·xyl2及Blasticidin抗性基因的克隆与测序 | 第37-44页 |
| ·酿酒酵母整合表达载体pZMYBX1的构建 | 第44-47页 |
| ·酿酒酵母整合表达载体pZMYX2的构建 | 第47-50页 |
| ·表达载体转化酿酒酵母W5 | 第50-52页 |
| ·酿酒酵母重组子的筛选与鉴定 | 第52页 |
| ·酿酒酵母重组子酶活的测定 | 第52-55页 |
| ·酿酒酵母重组子木糖、葡萄糖混合碳源发酵试验 | 第55-56页 |
| 第3章 结果与分析 | 第56-103页 |
| ·原生质体融合双亲株W5及20335特性初探结果 | 第56-60页 |
| ·W5及20335对数生长期的确定 | 第56页 |
| ·W5及20335乙醇耐受性测定结果 | 第56-58页 |
| ·W5及20335木糖、葡萄糖单碳源发酵试验结果 | 第58-59页 |
| ·W5及20335木糖、葡萄糖混合碳源发酵试验结果 | 第59-60页 |
| ·W5及20335原生质体制备及再生结果 | 第60-63页 |
| ·脱壁预处理时间对原生质制备率的影响 | 第60-61页 |
| ·酶解时间对原生质体制备率及再生率的影响 | 第61-63页 |
| ·W5及20335原生质体灭活处理结果 | 第63-65页 |
| ·W5及20335原生质体紫外线灭活处理结果 | 第63-64页 |
| ·W5及20335原生质体热灭活处理结果 | 第64-65页 |
| ·原生质体融合及融合子的检出结果 | 第65-66页 |
| ·融合子木糖、葡萄糖单碳源发酵试验结果 | 第66-71页 |
| ·融合子木糖单碳源发酵结果 | 第66-69页 |
| ·融合子葡萄糖单碳源发酵结果 | 第69-71页 |
| ·融合子木糖、葡萄糖混合碳源发酵试验结果 | 第71-73页 |
| ·G418对菌株W5及E.coli DH5α最低抑菌浓度测定结果 | 第73-74页 |
| ·G418对菌株W5最低抑菌浓度测定结果 | 第73页 |
| ·G418对E.col iDH5a最低抑菌浓度测定结果 | 第73-74页 |
| ·Blasticidin对菌株W5最低抑菌浓度测定结果 | 第74-75页 |
| ·xyl2及Blasticidin抗性基因的克隆与测序结果 | 第75-82页 |
| ·xyl2的克隆与测序结果 | 第75-78页 |
| ·Blasticidin抗性基因的克隆与测序结果 | 第78-82页 |
| ·酿酒酵母整合表达载体pZMYBX1的构建 | 第82-85页 |
| ·pYXAK-xyl1和pZMYT-bsd的单酶切结果 | 第82-83页 |
| ·重组质粒载体pZMYBX1阳性转化子的筛选与鉴定 | 第83-85页 |
| ·酿酒酵母整合表达载体pZMYX2的构建 | 第85-88页 |
| ·pCXSRKTr和pZMYT-xyl2的单酶切结果 | 第85-87页 |
| ·重组质粒载体pZMYX2阳性转化子的筛选与鉴定 | 第87-88页 |
| ·表达载体转化酿酒酵母W5 | 第88-90页 |
| ·pZMYX2线性化处理结果 | 第88-89页 |
| ·pZMYBX1线性化处理结果 | 第89-90页 |
| ·酿酒酵母重组子的筛选与鉴定 | 第90-93页 |
| ·重组子的筛选结果 | 第90-91页 |
| ·重组子的鉴定结果 | 第91-93页 |
| ·酿酒酵母重组子酶活测定结果 | 第93-99页 |
| ·考马斯亮蓝测定总蛋白质浓度结果 | 第93-94页 |
| ·木糖还原酶酶活的测定结果 | 第94-96页 |
| ·木糖醇脱氢酶酶活的测定结果 | 第96-98页 |
| ·木酮糖激酶酶活的测定结果 | 第98-99页 |
| ·酿酒酵母重组子木糖、葡萄糖混合碳源发酵试验结果 | 第99-100页 |
| ·总结 | 第100-103页 |
| 第4章 讨论 | 第103-108页 |
| ·酿酒酵母工程菌构建手段的选择 | 第103-104页 |
| ·原生质体制备条件的确定 | 第104-105页 |
| ·原生质体灭活方式对融合子发酵性能的影响 | 第105-106页 |
| ·基因工程菌株的碳源利用及产醇 | 第106-108页 |
| 第5章 结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-117页 |
| 附录1 | 第117-118页 |
| 附录2 | 第118-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
