| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| ·结核病现状 | 第11页 |
| ·DNA拓扑异构酶分类 | 第11-12页 |
| ·Topoisomerase Ⅱ的研究现状 | 第12-13页 |
| ·DNA Topoisomerase Ⅱ互作蛋白研究进展 | 第13-19页 |
| ·与Topoisomerase Ⅱ不同区域相互作用的蛋白 | 第14-16页 |
| ·在减数分裂过程中与Topoisomerase Ⅱ相互作用的蛋白 | 第16页 |
| ·在细胞中定位不同的相互作用蛋白 | 第16-19页 |
| ·结核分枝杆菌Topoisomerase Ⅱ结构与功能作用 | 第19-21页 |
| ·结核分枝杆菌Topoisomerase Ⅱ功能作用 | 第19页 |
| ·Toprim结构域的功能与作用 | 第19-21页 |
| ·蛋白质相互作用研究方法 | 第21-26页 |
| ·酵母双杂交 | 第21-22页 |
| ·pull down技术 | 第22页 |
| ·等离子共振技术 | 第22-23页 |
| ·免疫共沉淀 | 第23页 |
| ·荧光共振能量转移 | 第23-24页 |
| ·双分子荧光互补 | 第24-25页 |
| ·蛋白质微阵列 | 第25-26页 |
| 2 研究目的与意义 | 第26-27页 |
| 3 材料与方法 | 第27-42页 |
| ·材料 | 第27-31页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·各种分子生物学酶、常用试剂盒及常用试剂 | 第27-28页 |
| ·溶液及缓冲液 | 第28-29页 |
| ·仪器 | 第29-30页 |
| ·质粒 | 第30-31页 |
| ·菌株 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-42页 |
| ·结核分枝杆菌螺旋酶GyrB及其系列缺失突变体的构建 | 第31-37页 |
| ·结核分枝杆菌螺旋酶GyrB缺失突变体蛋白的表达与纯化 | 第37-40页 |
| ·酵母双杂交实验检测结核分枝杆菌螺旋酶GyrA、GyrB之间相互作用 | 第40-41页 |
| ·SPR方法检测结核分枝杆菌螺旋酶GyrA、GyrB之间的相互作用 | 第41页 |
| ·GST pull down检测结核分枝杆菌螺旋酶GyrA、GyrB之间的相互作用 | 第41-42页 |
| 4 结果与分析 | 第42-58页 |
| ·结核分枝杆菌螺旋酶GyrB与GyrA相互作用区域的分析 | 第42-43页 |
| ·各缺失突变体的构建及蛋白质的表达纯化 | 第43-50页 |
| ·GyrB突变体的pET28a和pGADT7载体的构建 | 第43-47页 |
| ·GyrB突变体蛋白质表达与纯化 | 第47-49页 |
| ·pGEX-KG-gyrA载体构建及带GST-tag A亚基的表达纯化 | 第49-50页 |
| ·酵母双杂交方法验证GyrA亚基与GyrB及其缺失突变体的相互作用 | 第50-52页 |
| ·GST pull down技术验证GyrA与GyrB缺失突变体之间的相互作用 | 第52-55页 |
| ·GST pull down检测GyrA与GyrB、GyrBΔ548-564相互作用 | 第53-54页 |
| ·GST pull down检测GyrA与GyrB1-518、GyrB1-531相互作用 | 第54页 |
| ·GST pull down检测GyrA与GyrB1-550、GyrBΔ531-550相互作用 | 第54-55页 |
| ·表面等离子共振方法检测A亚基与缺失突变体之间的相互作用 | 第55-58页 |
| ·GyrB结合活性趋势图及动力学常数 | 第55-56页 |
| ·各缺失突变体结合活力与野生型比较趋势图 | 第56-58页 |
| 5 讨论 | 第58-63页 |
| ·蛋白质二级结构在空间结构中的作用 | 第58页 |
| ·α螺旋531-550在B亚基中的重要意义 | 第58-59页 |
| ·GyrB-CTD在GyrA、GyrB重组过程的重要意义 | 第59-60页 |
| ·548-564aa短肽结构在B亚基中的重要意义 | 第60-61页 |
| ·Topoisomerase Ⅱ和药物靶标筛选 | 第61-62页 |
| ·T-segment在DNA螺旋酶内的运输 | 第62-63页 |
| 6 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
