| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-28页 |
| ·纤维素与纤维素酶 | 第10-14页 |
| ·纤维素结构 | 第11-12页 |
| ·纤维素酶作用机理 | 第12-14页 |
| ·纤维素酶的来源 | 第14-16页 |
| ·真菌纤维素酶 | 第14页 |
| ·细菌纤维素酶 | 第14-15页 |
| ·动物纤维素酶 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶的结构域及分类 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶催化域 | 第16页 |
| ·纤维素酶结合域 | 第16-17页 |
| ·土壤放线菌 Thermobifida fusca | 第17-21页 |
| ·Thermobifida fusca | 第17-18页 |
| ·Thermobifida fusca 分泌的纤维素酶系 | 第18-20页 |
| ·特殊纤维素酶 E4 | 第20-21页 |
| ·纤维素降解工程菌 | 第21-25页 |
| ·统合生物加工过程 | 第21-23页 |
| ·酵母的蛋白表达及乙醇发酵 | 第23-25页 |
| ·立题依据及研究路线 | 第25-28页 |
| ·立题依据 | 第25-26页 |
| ·研究路线 | 第26-28页 |
| 第二章 E4 及其重组基因同源建模 | 第28-34页 |
| ·纤维素酶 E4 序列分析 | 第28-31页 |
| ·各结构域蛋白序列搜索 PDB 数据库 | 第28-30页 |
| ·E4 同源建模 | 第30-31页 |
| ·质粒构建策略 | 第31-34页 |
| 第三章 E4 及其重组基因克隆及转化 | 第34-40页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要溶液配制方法 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·重组序列 PCR | 第35-36页 |
| ·重组序列酶切及与质粒连接 | 第36页 |
| ·质粒转化入 E.coli GT116 并进行阳性克隆筛选 | 第36-38页 |
| ·实验结果 | 第38-40页 |
| ·目的基因 PCR 结果 | 第38页 |
| ·阳性转化子筛选 | 第38-39页 |
| ·目的基因测序 | 第39-40页 |
| 第四章 重组酵母菌构建及目的蛋白表达 | 第40-50页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要溶液配制方法 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·质粒提取及酵母电转化 | 第41-43页 |
| ·阳性转化酵母蛋白表达及检测 | 第43-44页 |
| ·实验结果及讨论 | 第44-48页 |
| ·质粒小提检验 | 第44页 |
| ·酵母电转化阳性转化子筛选 | 第44-46页 |
| ·酵母蛋白表达培养及验证 | 第46-48页 |
| ·本章小结 | 第48-50页 |
| 第五章 各重组酶酶活测定及对比 | 第50-58页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要溶液配方 | 第50-51页 |
| ·试验方法 | 第51-53页 |
| ·水解圈法酶活定性测定 | 第51页 |
| ·酶反应的最适条件及稳定性测定 | 第51-52页 |
| ·不同底物条件下酶活测定 | 第52-53页 |
| ·实验结果及讨论 | 第53-58页 |
| ·酶活力定性测定（水解圈法） | 第53-54页 |
| ·各组酶最适反应温度、pH 及对比 | 第54-56页 |
| ·各组酶温度稳定性及对比 | 第56页 |
| ·各组酶之间不同底物反应差别对比 | 第56-58页 |
| 结论与展望 | 第58-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附件 | 第68页 |
