| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-39页 |
| ·肿瘤抑制因子p53 | 第16-25页 |
| ·p53的功能与激活 | 第17-19页 |
| ·p53负调控因子 | 第19-21页 |
| ·p53蛋白家族、异构体及结构域 | 第21-24页 |
| ·核仁与p53信号路径 | 第24-25页 |
| ·肝脏结构功能与发育 | 第25-32页 |
| ·肝脏的形态结构及斑马鱼作为肝脏发育研究模型的优势 | 第26-27页 |
| ·斑马鱼成肝细胞的起源与特化 | 第27-28页 |
| ·斑马鱼肝脏的发育过程 | 第28页 |
| ·肝脏发育的细胞分子机制 | 第28-32页 |
| ·def基因及def~(hi429)突变体 | 第32-34页 |
| ·斑马鱼作为发育生物学和分子生物学研究模型的优势 | 第34-38页 |
| ·本研究的内容、目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二章 材料和方法 | 第39-68页 |
| ·斑马鱼 | 第39-40页 |
| ·斑马鱼品系及饲养 | 第39页 |
| ·斑马鱼的交配及受精卵的收集 | 第39-40页 |
| ·人类细胞系及其培养和转染 | 第40-41页 |
| ·细胞系及其培养和冻存 | 第40-41页 |
| ·细胞转染 | 第41页 |
| ·大肠杆菌菌株 | 第41页 |
| ·Morpholino和siRNA | 第41-42页 |
| ·抗体 | 第42-43页 |
| ·蛋白酶抑制剂 | 第43页 |
| ·DNA相关操作方法 | 第43-47页 |
| ·基因克隆 | 第43-45页 |
| ·DNA测序 | 第45页 |
| ·质粒定点突变和基因内部特定片段的删除 | 第45-46页 |
| ·斑马鱼和人类细胞系基因组DNA的抽提 | 第46页 |
| ·斑马鱼胚胎原位细胞凋亡分析 | 第46-47页 |
| ·RNA相关操作方法 | 第47-51页 |
| ·斑马鱼胚胎及人类细胞系总RNA提取 | 第47页 |
| ·总RNA样品中基因组DNA的消化 | 第47页 |
| ·两步法RT-PCR(Reverse Transcription PCR,反转录PCR) | 第47-48页 |
| ·带帽mRNA的体外合成 | 第48页 |
| ·Northern印记分析 | 第48-50页 |
| ·斑马鱼胚胎整胚原位杂交(WISH) | 第50-51页 |
| ·蛋白质相关操作方法 | 第51-56页 |
| ·抗体的制备与纯化 | 第51-53页 |
| ·Western印记分析 | 第53-54页 |
| ·抗体免疫荧光染色 | 第54-55页 |
| ·免疫共沉淀 | 第55-56页 |
| ·流式细胞分析 | 第56页 |
| ·斑马鱼显微注射 | 第56-57页 |
| ·斑马鱼胚胎消化器官表型或p53蛋白水平拯救实验 | 第57页 |
| ·斑马鱼胚胎存活率分析 | 第57页 |
| ·序列比对及进化树分析 | 第57页 |
| ·常规培养基及化学试剂配方 | 第57-60页 |
| ·本课题所用引物、Morpholino、siRNA序列以及不同浓度的SDS-PAGE凝胶配方列表 | 第60-68页 |
| 第三章 核仁蛋白Def影响斑马鱼18S rRNA前体剪接 | 第68-74页 |
| ·Def蛋白系统进化分析 | 第68页 |
| ·斑马鱼和人类Def均为核仁蛋白 | 第68-71页 |
| ·斑马鱼def~(hi429)突变导致18S rRNA前体累积 | 第71页 |
| ·小结与讨论 | 第71-74页 |
| 第四章 斑马鱼def~(hi429)突变导致p53和△113p53蛋白大量上调并累积在核仁 | 第74-81页 |
| ·p53抗体的制备 | 第74-77页 |
| ·斑马鱼△113p53抗原的表达和纯化 | 第74页 |
| ·抗原免疫和抗体纯化、特异性评价 | 第74-77页 |
| ·斑马鱼def~(hi429)突变体中p53和△113p53蛋白表达大量上调 | 第77页 |
| ·大量上调的p53和△113p53蛋白定位于斑马鱼def~(hi429)突变体核仁 | 第77-78页 |
| ·小结与讨论 | 第78-81页 |
| 第五章 斑马鱼Def选择性介导p53和△113p53蛋白的降解及其生物学意义 | 第81-87页 |
| ·Def过表达选择性介导p53及其异构体△113p53蛋白的降解 | 第81-84页 |
| ·Def介导p53蛋白降解的生物学意义 | 第84-85页 |
| ·小结与讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 斑马鱼Def介导的p53蛋白降解不依赖于Mdm2和蛋白泛素化降解途径 | 第87-94页 |
| ·斑马鱼Def介导的p53和△113p53蛋白降解不依赖于Mdm2 | 第87-90页 |
| ·斑马鱼Def靶向p53 DNA结合域介导其降解 | 第90-91页 |
| ·斑马鱼Def介导的p53蛋白降解不依赖于蛋白泛素化降解途径 | 第91-92页 |
| ·小结与讨论 | 第92-94页 |
| 第七章 人类Def多态性呈现对p53/△133p53不同的降解活性 | 第94-98页 |
| ·人类def基因多态性分析 | 第94页 |
| ·hu-Def多态性呈现对p53/△133p53不同的降解活性 | 第94-96页 |
| ·小结与讨论 | 第96-98页 |
| 第八章 Def与Calpain 3共同介导p53降解 | 第98-114页 |
| ·hu-Def通过Calpain 3介导p53蛋白降解 | 第98-101页 |
| ·hu-Def与CAPN3形成复合物 | 第101-102页 |
| ·hu-Def或CAPN3表达下调介导的p53激活不依赖于RPL5和RPL11 | 第102-103页 |
| ·CAPN3表达下调导致细胞G1期阻滞和细胞凋亡增加 | 第103-105页 |
| ·斑马鱼CAPN3b与Def共同介导p53蛋白降解 | 第105-111页 |
| ·小结与讨论 | 第111-114页 |
| 第九章 Def通过CAPN3a调控斑马鱼胚胎早期肝脏发育 | 第114-117页 |
| ·CAPN3a而不是CAPN3b过表达能拯救def-MO引起的小肝脏表型 | 第114-115页 |
| ·CAPN3a而不是CAPN3b表达下调影响斑马鱼胚胎肝脏发育 | 第115-116页 |
| ·小结与讨论 | 第116-117页 |
| 第十章 结论与讨论 | 第117-124页 |
| ·结论 | 第117-119页 |
| ·讨论 | 第119-124页 |
| 参考文献 | 第124-137页 |
| 作者简介 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
