| 致谢 | 第1-13页 |
| 摘要 | 第13-16页 |
| Abstract | 第16-20页 |
| 縮略词表 | 第20-22页 |
| 第一章 文献综述 | 第22-40页 |
| 1 蛙类抗菌肽的发现及分类 | 第22-23页 |
| 2 蛙类抗菌肽的功能 | 第23-25页 |
| ·蛙类抗菌肽的抗菌活性 | 第23-25页 |
| ·蛙类抗菌肽的抗病毒功能 | 第25页 |
| 3 抗菌肽的分子改良 | 第25-29页 |
| ·α螺旋对抗菌肽抗菌活性的影响 | 第26-27页 |
| ·电荷对抗菌肽抗菌活性的影响 | 第27-28页 |
| ·疏水性对抗菌肽抗菌活性的影响 | 第28-29页 |
| ·两亲性对抗菌肽抗菌活性的影响 | 第29页 |
| 4 抗菌肽的抗菌机制 | 第29-32页 |
| 5 抗菌肽基因工程研究进展 | 第32-38页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第32-37页 |
| ·巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统 | 第37-38页 |
| 6 抗菌肽制剂开发现状 | 第38页 |
| 7 本研究的目的意义和主要内容 | 第38-40页 |
| ·本研究的目的意义 | 第38-39页 |
| ·本研究的主要内容 | 第39-40页 |
| 第二章 抗菌肽Palustrin-OG1的分子改良及改良肽的筛选 | 第40-84页 |
| 1 OG1的分子改良 | 第41-57页 |
| ·OG1前体肽序列比对及分析 | 第41-43页 |
| ·OG1及其改良肽的序列分析及结构预测 | 第43-48页 |
| ·OG1及其改良肽的化学合成及鉴定 | 第48-54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 2 OG1及其改良肽的抗菌活性及细胞毒性测定 | 第57-71页 |
| ·OG1及其改良肽的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度测定 | 第57-59页 |
| ·OGl及其改良肽的杀菌曲线测定 | 第59-63页 |
| ·OG1及其改良肽对猪红细胞的溶血率 | 第63-65页 |
| ·OG1及其改良肽OG2、OG2N对猪外周血单个核细胞增殖率的影响 | 第65-67页 |
| ·OG1及其改良肽OG2、OG2N对猪外周血单个核细胞LDH释放率的影响 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| 3 OG1及改良肽OG2、OG2N的抗菌机制研究 | 第71-84页 |
| ·透射电镜观察OG1及改良肽OG2、OG2N对细菌形态的影响 | 第71-74页 |
| ·SYTOX摄取试验检测OG1及改良肽OG2、OG2N对细菌细胞膜的影响 | 第74-78页 |
| ·DNA结合试验检测OG1及改良肽OG2、OG2N对DNA的结合能力 | 第78-80页 |
| ·无细胞蛋白合成抑制试验检测OG1及改良肽OG2、OG2N对蛋白合成的抑制作用 | 第80-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 第三章 改良肽OG2在大肠杆菌中的表达、分离纯化及抗菌活性测定 | 第84-128页 |
| 1 不同分子伴侣对OG2融合蛋白表达的影响 | 第85-102页 |
| ·TrxA、SUMO、intein1及intein2融合表达OG2的技术路线 | 第85-86页 |
| ·不同分子伴侣融合表达OG2的目的基因的克隆 | 第86-91页 |
| ·不同分子伴侣融合表达OG2的重组质粒的构建 | 第91-95页 |
| ·不同分子伴侣对融合蛋白可溶表达的影响 | 第95-100页 |
| ·讨论 | 第100-102页 |
| 2 不同蛋白酶对Trx融合蛋白切割效率的比较 | 第102-112页 |
| ·EK及TEV酶切割Trx-OG2融合蛋白的技术路线 | 第102-103页 |
| ·重组菌株BL21-pET32-TEV-OG2的构建 | 第103-104页 |
| ·Trx-EK-OG2及Trx-TEV-OG2融合蛋白的表达及纯化 | 第104-107页 |
| ·EK及TEV酶切割融合蛋白效率的比较 | 第107-110页 |
| ·重组OG2的活性检测 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-112页 |
| 3 利用内含肽系统高效表达及纯化OG2 | 第112-128页 |
| ·重组菌株诱导表达条件的优化 | 第112-116页 |
| ·融合蛋白的小量纯化(1mL Chitin)及目的肽OG2的释放 | 第116-121页 |
| ·融合蛋白的大量纯化(10mL Chitin)及目的肽OG2的释放 | 第121-124页 |
| ·重组OG2的抗菌活性测定 | 第124-125页 |
| ·OG2融合蛋白裂解方式的比较 | 第125-126页 |
| ·讨论 | 第126-128页 |
| 第四章 改良肽OG2在酵母中的表达、分离纯化及抗菌活性测定 | 第128-167页 |
| 1 利用P.pastoris表达系统分泌表达OG2 | 第129-142页 |
| ·P.pastoris分泌表达OG2的技术路线 | 第129-130页 |
| ·OG2、OG20及PS-OG2基因的克隆 | 第130-131页 |
| ·P.pastoris分泌表达OG2重组质粒的构建 | 第131-134页 |
| ·P.pastoris分泌表达OG2重组菌株的构建 | 第134-136页 |
| ·P.pastoris分泌表达OG2重组菌株的诱导表达 | 第136-139页 |
| ·P.pastoris重组菌株分泌表达产物的活性测定 | 第139-140页 |
| ·讨论 | 第140-142页 |
| 2 利用P.pastoris表达系统胞内表达OG2 | 第142-153页 |
| ·P.pastoris胞内表达OG2的技术路线 | 第142页 |
| ·目的基因克隆及单拷贝重组质粒的构建 | 第142-145页 |
| ·pAO-OG2串联表达载体的构建 | 第145-146页 |
| ·多拷贝重组酵母菌株的构建 | 第146-149页 |
| ·多拷贝重组酵母菌株的诱导表达及活性测定 | 第149-152页 |
| ·讨论 | 第152-153页 |
| 3 利用酿酒酵母表达系统胞内表达OG2 | 第153-158页 |
| ·酿酒酵母胞内表达OG2重组质粒的构建 | 第153-155页 |
| ·酿酒酵母胞内表达OG2重组菌株的构建 | 第155-156页 |
| ·酿酒酵母重组菌株胞内表达产物活性测定 | 第156-157页 |
| ·讨论 | 第157-158页 |
| 4 利用P.pastoris表达系统胞内表达OG2-HIS | 第158-167页 |
| ·OG2-HIS的克隆及重组质粒PICZ-OG2-HIS的构建 | 第158-159页 |
| ·P.pastoris胞内表达OG2-HIS重组菌株的构建 | 第159-160页 |
| ·不同培养基及诱导时间对OG2-HIS表达的影响 | 第160-163页 |
| ·OG2-HIS的分离纯化及活性测定 | 第163-165页 |
| ·讨论 | 第165-167页 |
| 第五章 小结、创新点与研究展望 | 第167-170页 |
| 1 小结 | 第167-168页 |
| 2 创新点 | 第168-169页 |
| 3 研究展望 | 第169-170页 |
| 第六章 参考文献 | 第170-185页 |
| 附录 | 第185-194页 |
| 作者简历及取得的科研成果 | 第194-195页 |
