| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-22页 |
| 符号说明 | 第22-24页 |
| 第一章 前言 | 第24-43页 |
| 第一节 概述 | 第24-25页 |
| 第二节 蜕皮激素信号途径 | 第25-37页 |
| 一.蜕皮激素的合成与代谢 | 第25-26页 |
| 二.蜕皮激素级联反应 | 第26-37页 |
| 1.蜕皮激素受体 | 第26-29页 |
| ·EcR | 第27-28页 |
| ·USP | 第28-29页 |
| 2.蜕皮激素受体的激活 | 第29-32页 |
| ·Hsp90是蜕皮甾类激素受体成熟途径中的中心蛋白 | 第30-31页 |
| ·Hsp70与Hsp40在蜕皮甾类激素受体成熟的早期起作用 | 第31-32页 |
| 3.蜕皮激素受体调控的初、次级反应基因 | 第32-37页 |
| ·激素接受子3(HR3) | 第33-34页 |
| ·E75 | 第34-35页 |
| ·Broad Complex(BR-C) | 第35-36页 |
| ·蜕皮激素下降对基因表达的影响 | 第36-37页 |
| 第三节 鸟苷酸激酶和腺苷酸激酶 | 第37-40页 |
| 一.鸟苷酸激酶 | 第37-38页 |
| 1.鸟苷酸激酶的鉴定 | 第37-38页 |
| 2.鸟苷酸激酶的分类和功能 | 第38页 |
| 二.腺苷酸激酶 | 第38-40页 |
| 第四节 RNA干扰及细胞系研究模型的应用 | 第40-43页 |
| 一.RNA干扰技术 | 第40-41页 |
| 二.细胞系模型的应用 | 第41-43页 |
| 第二章 棉铃虫表皮细胞系的鉴定及细胞系研究模型的建立 | 第43-55页 |
| 一.前言 | 第43-44页 |
| 二.材料和方法 | 第44-49页 |
| 1.材料 | 第44-45页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44-45页 |
| ·仪器 | 第45页 |
| 2.方法 | 第45-49页 |
| ·总RNA的提取 | 第45页 |
| ·反转录cDNA | 第45页 |
| ·半定量RT-PCR | 第45-46页 |
| ·Northern blot | 第46-48页 |
| ·配制Northern blot试剂 | 第46-47页 |
| ·Northern blot步骤 | 第47-48页 |
| ·RNAi | 第48-49页 |
| ·双链RNA的合成 | 第48-49页 |
| ·转染 | 第49页 |
| ·半定量RT-PCR | 第49页 |
| 三.结果 | 第49-53页 |
| 1.表皮细胞系的鉴定 | 第49-50页 |
| 2.细胞系可诱导性的检测 | 第50-51页 |
| 3.不同浓度激素对基因表达的影响 | 第51-52页 |
| 4.激素对基因表达的调控 | 第52-53页 |
| 四.讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 棉铃虫热休克蛋白同源物Hsc70和蜕皮激素受体EcRB1及超气门蛋白USP1的克隆表达及在20E信号通路中的功能鉴定 | 第55-86页 |
| 一.前言 | 第55-56页 |
| 二.材料与方法 | 第56-66页 |
| 1.材料 | 第56-57页 |
| ·实验动物 | 第56页 |
| ·试剂和仪器 | 第56-57页 |
| 2.方法 | 第57-66页 |
| ·细胞培养 | 第57页 |
| ·基因克隆 | 第57-59页 |
| ·HaEcRB1,HaUSP1和HaHsc70的基因克隆 | 第57页 |
| ·胶回收 | 第57-58页 |
| ·连接 | 第58页 |
| ·转化 | 第58页 |
| ·筛选 | 第58页 |
| ·提取阳性克隆重组质粒 | 第58-59页 |
| ·生物信息学和系统进化树分析 | 第59页 |
| ·半定量RT-PCR | 第59-60页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第60-62页 |
| ·重组质粒HaUSP1-pET30a和HaHsc70-pET30a的构建 | 第60-61页 |
| ·重组质粒HaUSP1-pET30a和HaHsc70-pET30a转化大肠杆菌表达菌株 | 第61页 |
| ·试表达 | 第61页 |
| ·大规模表达 | 第61-62页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第62-63页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第63页 |
| ·激素对HaHsc70的影响 | 第63页 |
| ·RNAi | 第63-64页 |
| ·免疫细胞化学 | 第64-65页 |
| ·HaEcRB1,HaUSP1和HaHsc70的细胞定位 | 第64-65页 |
| ·干扰Hsc70后HaEcRB1和HaUSP1的细胞定位 | 第65页 |
| ·蛋白相互作用实验 | 第65页 |
| ·免疫共沉淀 | 第65-66页 |
| ·免疫印迹 | 第66页 |
| 三.实验结果 | 第66-82页 |
| 1.HaEcRB1,HaUSP1和HaHsc70的基因克隆,序列比对及进化树分析 | 第66-75页 |
| 2.HaEcRB1,HaUSP1和HaHsc70的表达模式 | 第75页 |
| 3.激素对HaHsc70的调控 | 第75-76页 |
| 4.HaEcRB1,HaUSP1和HaHsc70在20E信号通路中的功能研究 | 第76-78页 |
| 5.HaHsc70的细胞定位及其对HaUSP1和HaEcRB1表达量的影响 | 第78-81页 |
| 6.HaHsc70和HaUSP1的相互作用 | 第81-82页 |
| 四.讨论 | 第82-86页 |
| 第四章 蜕皮激素诱导的两种激酶 | 第86-111页 |
| 第一节 鸟苷酸激酶 | 第86-98页 |
| 一.前言 | 第86-87页 |
| 二.材料与方法 | 第87-89页 |
| 1.材料 | 第87页 |
| ·实验动物 | 第87页 |
| ·试剂和仪器 | 第87页 |
| 2.方法 | 第87-89页 |
| ·HaGK基因ORF的扩增 | 第87页 |
| ·HaGK基因序列分析 | 第87页 |
| ·qRT-PCR | 第87-88页 |
| ·激素诱导 | 第88页 |
| ·重组表达 | 第88-89页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第89页 |
| ·免疫细胞化学 | 第89页 |
| ·RNAi | 第89页 |
| 三.实验结果 | 第89-97页 |
| 1.HaGK的扩增和鉴定 | 第89-92页 |
| 2. HaGK的表达模式 | 第92-94页 |
| 3. 激素对HaGK的影响 | 第94页 |
| 4. HaGK的重组表达和抗体制备 | 第94-95页 |
| 5. HaGK的细胞定位 | 第95-97页 |
| 6. HaEcRB1和HaUSP1沉默后对HaGK表达的影响 | 第97页 |
| 四.讨论 | 第97-98页 |
| 第二节 腺苷酸激酶1 | 第98-111页 |
| 一.前言 | 第98-100页 |
| 二.材料与方法 | 第100-102页 |
| 1.材料 | 第100页 |
| 2.方法 | 第100-102页 |
| ·HaAK1基因序列分析 | 第100页 |
| ·qRT-PCR | 第100页 |
| ·激素处理 | 第100页 |
| ·重组表达 | 第100-101页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第101页 |
| ·免疫细胞化学 | 第101页 |
| ·RNAi | 第101-102页 |
| 三.实验结果 | 第102-109页 |
| 1. HaAK1的扩增和鉴定 | 第102-104页 |
| 2. HaAK1的表达模式 | 第104-106页 |
| 3. 激素对HaAK1的影响 | 第106页 |
| 4. HaAK1的重组表达和抗体制备 | 第106-107页 |
| 5. HaAK1的细胞定位 | 第107-109页 |
| 6. HaEcRB1沉默后对HaAK1表达的影响 | 第109页 |
| 四.讨论 | 第109-111页 |
| 论文创新点总结及讨论 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第123-124页 |
| 发表论文 | 第124-142页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第142页 |
