金黄色葡萄球菌A型肠毒素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩写词表 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| ·国内外研究进展 | 第13-20页 |
| ·金葡菌肠毒素的超抗原特性 | 第13页 |
| ·金葡菌肠毒素的生化特性 | 第13-14页 |
| ·金葡菌肠毒素引起食物中毒的危害 | 第14-16页 |
| ·金葡菌肠毒素中毒的临床症状 | 第16页 |
| ·金葡菌肠毒素中毒的致病机制 | 第16-17页 |
| ·金葡菌肠毒素中毒的流行特点 | 第17页 |
| ·金葡菌肠毒素检测方法的研究 | 第17-20页 |
| ·研究的目的意义及研究内容 | 第20-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·抗原、实验动物及细胞 | 第23页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第23页 |
| ·BALB/c小鼠的免疫 | 第23页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第23-25页 |
| ·抗原最佳包被浓度和抗体最佳工作浓度的确定 | 第24-25页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第25页 |
| ·最佳一抗反应时间的确定 | 第25页 |
| ·最佳酶标二抗反应时间的确定 | 第25页 |
| ·细胞融合 | 第25-30页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·SP2/0骨髓瘤细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第27页 |
| ·免疫脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的融合 | 第27页 |
| ·阳性孔的筛选 | 第27-28页 |
| ·杂交瘤阳性细胞的克隆化 | 第28-29页 |
| ·单克隆抗体的制备及纯化 | 第29-30页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第30-33页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第30页 |
| ·单克隆抗体亚型的鉴定 | 第30页 |
| ·单克隆抗体纯化效果的检测 | 第30页 |
| ·单克隆抗体效价的测定 | 第30-31页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第31-32页 |
| ·单克隆抗体的表位特异性检测 | 第32页 |
| ·单克隆抗体相对亲和力的测定 | 第32-33页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存复苏 | 第33页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性测定 | 第33页 |
| ·检测SEA的间接竞争ELISA方法的建立 | 第33-39页 |
| ·抗原的包被浓度和单抗的工作浓度的初步确定 | 第34页 |
| ·抗原最佳包被浓度的确定 | 第34-35页 |
| ·抗体最佳工作浓度的确定 | 第35页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第35页 |
| ·最佳竞争时间的确定 | 第35-36页 |
| ·二抗最佳反应时间的确定 | 第36页 |
| ·样品与抗体的最佳配比的确定 | 第36页 |
| ·间接竞争ELISA方法标准曲线的建立 | 第36-37页 |
| ·标准曲线的评价 | 第37页 |
| ·样品的处理 | 第37页 |
| ·检测限和定量限的测定 | 第37页 |
| ·添加回收试验 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-57页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第39-40页 |
| ·小鼠效价的测定 | 第40-41页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第41-42页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第42页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第42-48页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体数目分析 | 第42页 |
| ·McAb的亚类鉴定 | 第42-43页 |
| ·McAb的纯化效果检测 | 第43-44页 |
| ·McAb的效价测定 | 第44-45页 |
| ·McAb的特异性 | 第45页 |
| ·McAb的表位特异性 | 第45-47页 |
| ·McAb的相对亲和力 | 第47页 |
| ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性 | 第47-48页 |
| ·检测SEA的间接竞争ELISA方法的建立 | 第48-57页 |
| ·抗原的包被浓度和单抗的工作浓度的初步确定 | 第48-49页 |
| ·抗原最佳包被浓度的确定 | 第49页 |
| ·抗体最佳工作浓度的确定 | 第49-50页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第50-51页 |
| ·最佳竞争时间的确定 | 第51-52页 |
| ·二抗最佳反应时间的确定 | 第52页 |
| ·抗原与抗体的最佳配比的确定 | 第52-53页 |
| ·标准曲线的建立 | 第53页 |
| ·标准曲线的评价 | 第53-55页 |
| ·检测限和定量限 | 第55页 |
| ·回收率 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-63页 |
| ·间接竞争ELISA方法的建立 | 第57-58页 |
| ·ELISA方法的影响因素分析 | 第58-59页 |
| ·样品添加试验 | 第59页 |
| ·动物免疫 | 第59-60页 |
| ·细胞融合的影响因素 | 第60页 |
| ·腹水的生产与纯化 | 第60-61页 |
| ·抗原表位分析 | 第61-62页 |
| ·抗体亲和力分析 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 研究生期间发表的论文和参编的书籍 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
