| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-41页 |
| ·细胞色素P450酶 | 第17-19页 |
| ·细胞色素P450酶概述 | 第17-18页 |
| ·细胞色素P450 BM3 | 第18-19页 |
| ·用表达P450酶的重组菌进行生物催化 | 第19-20页 |
| ·提高P450酶催化性能的方法 | 第20-21页 |
| ·固定化技术 | 第20页 |
| ·辅酶再生 | 第20-21页 |
| ·利用生物技术对P450酶进行改造 | 第21页 |
| ·选择不同的反应溶剂 | 第21页 |
| ·P450酶催化反应过程中的辅酶再生系统 | 第21-24页 |
| ·酶耦联法再生 | 第22页 |
| ·电化学法再生 | 第22-23页 |
| ·用过氧化物支路替代NADPH | 第23-24页 |
| ·其它方法 | 第24页 |
| ·靛蓝生产研究进展 | 第24-32页 |
| ·从植物中提取靛蓝 | 第24-26页 |
| ·化学合成法制备靛蓝 | 第26-29页 |
| ·微生物法制备靛蓝 | 第29-32页 |
| ·本论文的研究思路及目标 | 第32页 |
| 参考文献 | 第32-41页 |
| 第二章 重组大肠杆菌表达细胞色素P450 BM3的条件优化 | 第41-54页 |
| ·引言 | 第41-42页 |
| ·材料与方法 | 第42-47页 |
| ·材料与仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43页 |
| ·实验设计 | 第43-46页 |
| ·数据处理 | 第46-47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-51页 |
| ·影响重组大肠杆菌表达P450 BM3的重要因素 | 第47-49页 |
| ·响应面的拟合以及最佳操作条件的确定 | 第49-51页 |
| ·拟合优化的验证 | 第51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 第三章 可表达细胞色素P450 BM3的重组大肠杆菌催化吲哚制备靛蓝 | 第54-67页 |
| ·引言 | 第54-55页 |
| ·材料与方法 | 第55-58页 |
| ·菌株和质粒 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·仪器 | 第55-56页 |
| ·培养条件 | 第56页 |
| ·重组大肠杆菌的生物催化反应 | 第56页 |
| ·吲哚和靛蓝的分析 | 第56-58页 |
| ·数据分析 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-64页 |
| ·重组大肠杆菌制备靛蓝的反应进程分析 | 第58-59页 |
| ·吲哚及靛蓝浓度对靛蓝制备的影响 | 第59-60页 |
| ·pH对靛蓝制备的影响 | 第60-61页 |
| ·反应温度对靛蓝制备的影响 | 第61-62页 |
| ·葡萄糖浓度对靛蓝制备的影响 | 第62-63页 |
| ·辅酶再生对重组大肠杆菌催化吲哚制备靛蓝的影响 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 第四章 海藻酸钙胶囊化重组E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3)催化吲哚制备靛蓝 | 第67-82页 |
| ·引言 | 第67-68页 |
| ·材料与方法 | 第68-71页 |
| ·菌种 | 第68页 |
| ·试剂 | 第68页 |
| ·仪器 | 第68-69页 |
| ·培养条件 | 第69页 |
| ·重组E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3)细胞固定化 | 第69页 |
| ·重组E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3)的生物转化体系 | 第69页 |
| ·固定化E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3)细胞的重复使用 | 第69页 |
| ·吲哚和靛蓝的分析 | 第69-70页 |
| ·重组E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3)细胞密度测定 | 第70-71页 |
| ·数据分析 | 第71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-79页 |
| ·胶囊制备条件的影响 | 第71-74页 |
| ·固定化重组大肠杆菌制备靛蓝的反应条件优化 | 第74-78页 |
| ·固定化重组大肠杆菌制备靛蓝的重复多批次反应 | 第78-79页 |
| ·小结 | 第79页 |
| 参考文献 | 第79-82页 |
| 第五章 共表达P450 BM3和葡萄糖脱氢酶的重组菌构建及其在NADPH再生中的应用 | 第82-103页 |
| ·引言 | 第82-83页 |
| ·材料与方法 | 第83-89页 |
| ·酶、试剂盒与试剂 | 第83页 |
| ·质粒与菌株 | 第83页 |
| ·仪器 | 第83-84页 |
| ·质粒提取和转化 | 第84-85页 |
| ·表达载体pET28a(+)-P450 BM3-gdh0310的构建 | 第85-86页 |
| ·培养条件 | 第86页 |
| ·酶活的测定 | 第86-87页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第87-88页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第88-89页 |
| ·重组E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3-gdh0310)和E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3)的生物转化体系 | 第89页 |
| ·靛监浓度测定 | 第89页 |
| ·数据分析 | 第89页 |
| ·结果与讨论 | 第89-100页 |
| ·质粒pET28a(+)-P450BM3-gdh0310的构建 | 第89-92页 |
| ·重组大肠杆菌中P450 BM3和葡萄糖脱氢酶的共表达 | 第92-94页 |
| ·重组E. coil BL21(pET28a(+)-P450BM3-gdh0310)共表达P450 BM3和GDH的条件优化 | 第94-97页 |
| ·重组E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3-gdh0310)在靛蓝制备反应中的辅酶再生作用 | 第97-99页 |
| ·重组E. coil BL21(pET28a(+)-P450 BM3-gdh0310)在靛蓝制备反应中的应用初步研究 | 第99-100页 |
| ·小结 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-103页 |
| 第六章 共表达P450 BM3和葡萄糖脱氢酶的重组E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3-gdh03101催化吲哚制备靛蓝 | 第103-112页 |
| ·引言 | 第103-104页 |
| ·材料与方法 | 第104页 |
| ·菌种 | 第104页 |
| ·培养基与培养方法 | 第104页 |
| ·重组E. coil BL21(pET28a(+)-P450 BM3-gdh0310)的生物转化体系 | 第104页 |
| ·靛蓝浓度的测定 | 第104页 |
| ·数据分析 | 第104页 |
| ·结果与讨论 | 第104-110页 |
| ·重组E. coil BL21(1)ET28a(+)-P450 BM3-gdh0310)制备靛蓝的反应进程分析 | 第104-106页 |
| ·吲哚浓度对重组E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3-gdh0310)催化反应的影响 | 第106-107页 |
| ·反应温度对重组E. coil BL21(pET28a(+)-P450 BM3-gdh0310)催化反应的影响 | 第107-108页 |
| ·葡萄糖浓度对重组E. coil BL21(pET28a(+)-P450 BM3-gdh0310)催化反应的影响 | 第108-109页 |
| ·摇床转速对重组E. coli BL21(pET28a(+)-P450 BM3-gdh0310)催化反应的影响 | 第109页 |
| ·底物分批加入对提高靛蓝产量的影响 | 第109-110页 |
| ·小结 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-112页 |
| 第七章 P450 BM3和葡萄糖脱氢酶协同催化吲哚制备靛蓝的酶促动力学初步研究 | 第112-126页 |
| ·引言 | 第112页 |
| ·材料与方法 | 第112-116页 |
| ·菌种 | 第112-113页 |
| ·试剂 | 第113页 |
| ·培养条件 | 第113页 |
| ·粗酶液的制备 | 第113页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第113页 |
| ·反应初速度的测定 | 第113-114页 |
| ·数学模型的建立 | 第114-116页 |
| ·数据分析 | 第116页 |
| ·结果与讨论 | 第116-123页 |
| ·P450 BM3催化反应的动力学常数确定 | 第116-118页 |
| ·GDH催化反应的动力学常数确定 | 第118-120页 |
| ·双酶耦合催化吲哚制备靛蓝的反应动力学模型 | 第120-123页 |
| ·小结 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-126页 |
| 第八章 结论与展望 | 第126-129页 |
| ·结论 | 第126-128页 |
| ·展望 | 第128-129页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
