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北京鸭胸肌发育候选基因的研究

摘要第1-7页
 ABSTRACT第7-16页
前言第16-18页
第一部分 文献综述第18-42页
 一 骨骼肌的发生与发育第18-23页
  1 骨骼肌的发生第18-19页
  2 肌肉发育的调控第19-23页
  3 结语第23页
 二 细胞生成素基因研究进展第23-28页
  1 MyoG 基因的定位与结构第23-24页
  2 MyoG 基因表达的时间性第24-26页
  3 MyoG 基因的多态性第26-27页
  4 小结第27-28页
 三 肌肉生长抑制素基因研究进展第28-33页
  1 MSTIN 基因的结构第28-29页
  2 MSTIN 基因的遗传效应及同源性分析第29页
  3 MSTIN 基因的定位第29页
  4 MSTIN 基因的功能第29-30页
  5 MSTIN 基因的作用机制第30-31页
  6 MSTIN 基因的特异性表达第31-32页
  7 MSTIN 基因的突变及多态性第32页
  8 MSTIN 基因的应用前景第32-33页
 四 胰岛素样生长因子系统组成及生理功能第33-36页
  1 IGF 系统的组成第33-34页
  2 IGF-I 的作用机理第34-35页
  3 IGF-1 的促生长作用第35页
  4 IGF-1 与肌肉生长的关系第35-36页
 五 生长激素基因结构及生理作用第36-39页
  1 GH 基因的结构第36-37页
  2 GHR 基因的结构第37页
  3 GH 与 GHR 间的信号传导第37-38页
  4 GH 的促生长作用第38-39页
  5 GH 对物质代谢的影响第39页
 六 GHRH 核酸质粒对动物生长的促进作用第39-42页
  1 GHRH 的结构第39-40页
  2 GHRH 的功能第40页
  3 GHRH 促进GH 分泌的机理第40页
  4 GHRH 核酸制剂的制备与应用第40-42页
第二部分 实验研究第42-136页
 实验一 北京鸭 GHR、IGF-1、MSTIN、MyoG 基因的克隆与序列分析第42-61页
  1 材料和方法第42-49页
   ·材料第42-44页
   ·方法第44-49页
  2 结果第49-56页
   ·RNA 的提取第49-50页
   ·RT-PCR 扩增结果第50页
   ·PCR 扩增产物的克隆第50页
   ·菌落PCR 扩增检测第50页
   ·PCR 测序结果第50-54页
   ·克隆序列的遗传分析与生物信息学分析第54-56页
  3 讨论第56-59页
   ·MyoG 基因的克隆与分析第56-57页
   ·IGF-1 基因的克隆与分析第57页
   ·MSTIN 基因的克隆与分析第57-58页
   ·GHR 基因的克隆与分析第58-59页
  4 结论第59-61页
 实验二 不同日龄北京鸭胸肌组织MyoG、GHR、IGF-1、MSTIN 基因表达的发育性变化研究..第61-71页
  1 材料和方法第61-62页
   ·样品采集第61页
   ·RNA 提取与反转录第61页
   ·引物设计第61-62页
   ·平台期的确定第62页
   ·半定量PCR 法检测不同日龄北京鸭胸肌组织目标基因mRNA 的表达丰度第62页
  2 实验结果第62-65页
   ·RNA 的提取第62页
   ·目标基因的扩增次数第62-63页
   ·候选基因表达丰度的发育性变化第63-65页
  3 讨论第65-70页
   ·关于MyoG 基因表达的时间性分析第65-67页
   ·不同日龄北京鸭胸肌MSTIN 基因表达丰度的变化第67-68页
   ·不同日龄北京鸭胸肌GHR 基因表达丰度的变化第68-69页
   ·不同日龄北京鸭胸肌IGF-1 基因表达丰度的变化第69-70页
  4 结论第70-71页
 实验三 GH 基因多态性与北京鸭胸肌发育相关性状的关联分析第71-93页
  1 材料和方法第71-81页
   ·材料第71-73页
   ·方法第73-81页
  2 结果与分析第81-87页
   ·基因组 DNA 提取第81页
   ·GH 基因组DNA 的PCR 扩增结果第81-82页
   ·SSCP 检测结果与分析第82-83页
   ·RFLP 检测结果与分析第83页
   ·GH 内含3 的基因型频率及其等位基因频率第83页
   ·GH 引物1 多态位点基因型 Hardy-weinberg 平衡的χ~2 适合性检验第83-84页
   ·GH 多态位点序列的测定第84-85页
   ·GH 内含子3 标记位点纯合度、杂合度、有效等位基因数和多态信息含量第85页
   ·GH 内含子355CP 多态与北京鸭胸肌的相关性分析第85-87页
  3 讨论第87-92页
   ·采样及 DNA 提取第87-88页
   ·PCR-RFLP 分析第88-89页
   ·PCR-SSCP 研究分析第89-90页
   ·GH 内含子4 的RFLP 分析第90-91页
   ·GH 内含子3 SSCP 多态位点与北京鸭胸肌发育候选指标的相关性分析第91-92页
   ·GH 内含子3 多态性位点的群体遗传分析第92页
  4 结论第92-93页
 实验四 IGF-1 基因多态性与北京鸭胸肌发育相关性状的关联分析第93-102页
  1 材料和方法第93-94页
   ·引物设计第93-94页
   ·PCR 扩增条件第94页
   ·其它第94页
  2 结果第94-100页
   ·IGF-1基因组DNA的PCR扩增结果第94-95页
   ·引物IGF-5’end(2)扩增结果的酶切分析第95-96页
   ·引物IGF-5’末段扩增产物SSCP分析结果第96-97页
   ·引物IGF-5’end(5)扩增产物的基因型频率及其等位基因频率第97页
   ·引物IGF-5’end(5)扩增产物多态Hardy-weinberg 平衡检验第97-98页
   ·引物IGF-5’end(5)扩增产物标记位点纯合度、杂合度、有效等位基因数和多态信息含量第98页
   ·IGF-5 末端多态位点碱基序列的测定第98页
   ·引物IGF-5’end(5)扩增产物SSCP 多态性与北京鸭胸肌的相关性分析第98-100页
  3 讨论第100-101页
   ·IGF-1 5’末端的 RFLP 分析第100-101页
   ·北京鸭 IGF-1 5’末端序列的SSCP 分析第101页
   ·北京鸭IGF-1 5’末端序列多态位点的群体遗传学分析第101页
  4 结论第101-102页
 实验五 MyoG 基因多态性与北京鸭胸肌发育相关性状的关联分析第102-105页
  1 材料和方法第102-103页
   ·引物设计第102页
   ·PCR 扩增条件第102-103页
   ·其它第103页
  2 结果第103-104页
   ·基因组DNA 的PCR 扩增结果第103页
   ·PCR 产物的SSCP 分析结果第103-104页
  3 讨论第104-105页
 实验六 鸭 MSTIN 基因部分序列的基因组PCR 扩增第105-111页
  1 材料和方法第105-106页
   ·引物设计第105页
   ·其它第105-106页
  2 结果与分析第106-110页
   ·MSTIN DNA PCR 扩增结果及阳性克隆的鉴定第106页
   ·MSTIN 基因组 PCR 扩增测序结果第106-108页
   ·克隆序列的生物信息学分析第108-110页
  3 结论第110-111页
 实验七 MSTIN 基因多态性与北京鸭胸发育相关性状的关联分析第111-121页
  1 材料和方法第111-112页
   ·材料第111页
   ·方法第111-112页
  2 结果与分析第112-118页
   ·基因组PCR 扩增结果第112-113页
   ·PCR-SSCP 检测结果与分析第113-114页
   ·MSTIN 外显子3 的群体遗传学分析第114-116页
   ·MSTIN 外显子3 PCR 产物碱基序列的测定第116页
   ·MSTIN 外显子3 多态位点与胸肌发育指标的相关性分析第116-118页
  3 讨论第118-120页
   ·关于鸭SSCP、RFLP 多态分析引物的设计第118-119页
   ·MSTIN 基因的多态性分析第119-120页
   ·MSTIN 基因外显子3 的群体遗传学分析第120页
  4 结论第120-121页
 实验八 北京鸭GHRH 基因的克隆与分析第121-136页
  1 材料第121页
   ·试验动物及样品采集第121页
   ·主要实验仪器和器械第121页
   ·溶液配制第121页
   ·试剂盒第121页
  2 方法第121-126页
   ·实验原理第121页
   ·引物设计第121-122页
   ·RT(反转录反应)和PCR 扩增第122-123页
   ·PCR 产物的回收第123-124页
   ·连接第124页
   ·感受态细胞的制备第124页
   ·转化第124页
   ·重组质粒DNA 的快速鉴定—Cracking 法第124页
   ·重组质粒DNA 的提取第124-125页
   ·酶切第125-126页
   ·测序第126页
  3 结果第126-134页
   ·RNA 提取第126页
   ·GHRH1 primer ,M13 primer 4 RT-PCR 扩增结果与产物的鉴定及序列分析第126-129页
   ·GHRH(中)引物RT-PCR 扩增结果与产物的鉴定及序列分析第129-134页
  4 讨论第134-135页
  5 继续研究的内容第135页
  6 结论第135-136页
第三部分 总结论第136-138页
第四部分 参考文献第138-153页
第五部分 附录第153-178页
第六部分 缩略词第178-180页
致谢第180-181页
个人简介第181页

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