| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 缩略词 | 第14-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-44页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的病原学 | 第16-27页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的发现 | 第16页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的特征 | 第16-17页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的毒力 | 第17-27页 |
| ·荚膜 | 第18页 |
| ·脂多糖 | 第18-19页 |
| ·外膜蛋白 | 第19-20页 |
| ·溶血外毒素 | 第20-24页 |
| ·转铁结合蛋白 | 第24-26页 |
| ·酶类 | 第26页 |
| ·菌毛和鞭毛 | 第26-27页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的流行病学及危害 | 第27-31页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的发生和传播 | 第27-28页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的流行现状 | 第28-29页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的危害 | 第29-31页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的临床症状 | 第31-32页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的病理学 | 第32-33页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的病理变化 | 第32页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎致病机理 | 第32-33页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的诊断 | 第33-38页 |
| ·细菌分离鉴定 | 第33-34页 |
| ·补体结合试验 | 第34页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第34-35页 |
| ·凝集试验 | 第35-36页 |
| ·间接血凝试验 | 第36页 |
| ·间接荧光抗体试验 | 第36页 |
| ·乳胶凝集试验 | 第36-37页 |
| ·免疫扩散试验 | 第37页 |
| ·沉淀试验 | 第37页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第37-38页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的免疫预防 | 第38-44页 |
| ·全细菌灭活疫苗 | 第39页 |
| ·亚单位疫苗 | 第39-40页 |
| ·弱毒疫苗 | 第40-41页 |
| ·ghosts疫苗 | 第41-42页 |
| ·口服疫苗 | 第42-44页 |
| 第2章 胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅳ基因的克隆、测序及表达 | 第44-64页 |
| ·研究目的和意义 | 第44页 |
| ·材料与方法 | 第44-54页 |
| ·材料 | 第44-49页 |
| ·质粒及菌株 | 第44-45页 |
| ·主要药品及试剂 | 第45页 |
| ·抗生素的配制 | 第45页 |
| ·细菌培养基的配制 | 第45-46页 |
| ·质粒抽提与鉴定试剂的配制 | 第46-47页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液的配制 | 第47-48页 |
| ·Western blot缓冲液的配制 | 第48页 |
| ·其它试剂的配制 | 第48页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-54页 |
| ·细菌的增殖及基因组的提取 | 第49页 |
| ·apxⅣ3.6片段的扩增 | 第49页 |
| ·apxⅣA5、apxⅣA3片段的扩增 | 第49-50页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第50页 |
| ·PCR产物的克隆与测序 | 第50页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制各(氯化钙法) | 第50-51页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第51页 |
| ·质粒的提取 | 第51-52页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第52页 |
| ·重组表达质粒pETapxⅣA5和pETapxⅣA3的构建 | 第52页 |
| ·诱导表达 | 第52页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第52-53页 |
| ·Western blot | 第53页 |
| ·APP感染小鼠血清的制备 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-60页 |
| ·apxⅣ3.6、apxⅣA5与apxⅣA3的克隆与测序 | 第54-57页 |
| ·pETapxⅣA5与pETapxⅣA3表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第58页 |
| ·表达产物的Western-blot检测 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| ·apxⅣ基因的克隆与表达 | 第60-61页 |
| ·ApxⅣ的作用 | 第61页 |
| ·ApxⅣ的应用 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-64页 |
| 第3章 猪传染性胸膜肺炎鉴别诊断方法研究 | 第64-80页 |
| ·研究目的和意义 | 第64页 |
| ·材料与方法 | 第64-67页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·主要试剂及材料 | 第64-65页 |
| ·血清 | 第65页 |
| ·包涵体提取用缓冲液的配制 | 第65页 |
| ·ELISA及IHA缓冲液的配制 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-67页 |
| ·包涵体提取 | 第65-66页 |
| ·不可溶性表达产物(包涵体)的溶解和复性 | 第66页 |
| ·猪胸膜肺炎疫苗免疫血清的制备 | 第66页 |
| ·ApxⅣ-ELISA操作程序 | 第66页 |
| ·ApxⅣ-ELISA最佳抗原包被量和血清稀释度的选择 | 第66页 |
| ·ApxⅣ-ELISA判断标准的确定 | 第66-67页 |
| ·ApxⅣ-ELISA重复性检测 | 第67页 |
| ·ApxⅣ-ELISA分析特异性检测 | 第67页 |
| ·ApxⅣ-ELISA与间接血凝试验(IHA)对比试验 | 第67页 |
| ·包被抗原保存期的测定 | 第67页 |
| ·结果与分析 | 第67-75页 |
| ·rApxⅣAN抗原最佳包被量和血清最佳稀释度的确定 | 第67-70页 |
| ·ApxⅣ-ELISA判断标准 | 第70页 |
| ·ApxⅣ-ELISA重复性 | 第70页 |
| ·ApxⅣ-ELISA分析特异性 | 第70-72页 |
| ·ApxⅣ-ELISA与IHA对比试验 | 第72页 |
| ·疫苗免疫动物和活菌感染动物中Apx毒素抗体的检测 | 第72-74页 |
| ·包被抗原保存期的测定 | 第74页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的血清学调查 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-79页 |
| ·细菌裂解 | 第75页 |
| ·包涵体的溶解及复性 | 第75-76页 |
| ·ApxⅣ-ELISA非特异性的消除 | 第76页 |
| ·ApxⅣ-ELISA的种特异性 | 第76-77页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的鉴别诊断 | 第77-78页 |
| ·ApxⅣ-ELISA的临床应用 | 第78-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 第4章 胸膜肺炎放线杆菌外毒素单克隆抗体研究 | 第80-102页 |
| ·研究目的意义 | 第80页 |
| ·材料与方法 | 第80-86页 |
| ·材料 | 第80-81页 |
| ·细胞、菌株、载体、动物 | 第80-81页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第81页 |
| ·培养基及主要试剂的配制 | 第81页 |
| ·方法 | 第81-86页 |
| ·单克隆抗体制备的技术路线 | 第81页 |
| ·抗原的制备 | 第81-82页 |
| ·动物免疫 | 第82页 |
| ·SP2／O骨髓瘤细胞的活化 | 第82-83页 |
| ·SP2／O骨髓瘤细胞的制备 | 第83页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第83页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第83-84页 |
| ·细胞融合 | 第84页 |
| ·间接ELISA方法检测杂交瘤细胞上清 | 第84页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化(有限稀释法) | 第84-85页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第85页 |
| ·单克隆抗体的生产和效价测定 | 第85页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第85页 |
| ·单克隆抗体的结合活性及特异性鉴定 | 第85-86页 |
| ·单克隆抗体识别表位分析 | 第86页 |
| ·结果与分析 | 第86-95页 |
| ·抗原的制备 | 第86-88页 |
| ·细胞融合 | 第88页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第88页 |
| ·单克隆抗体的生产和效价测定 | 第88-90页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第90页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第90-91页 |
| ·ApxⅠ、ApxⅡ和ApxⅢ单克隆抗体的结合活性与特异性 | 第91页 |
| ·ApxⅣ单克隆抗体的特异性 | 第91-93页 |
| ·单克隆抗体识别表位分析 | 第93-95页 |
| ·讨论 | 第95-100页 |
| ·免疫用抗原 | 第95-96页 |
| ·动物的免疫 | 第96-97页 |
| ·细胞融合 | 第97-98页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第98页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆 | 第98-99页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第99页 |
| ·污染和控制 | 第99页 |
| ·ApxⅠ、ApxⅡ和ApxⅢ单克隆抗体的结合活性与特异性 | 第99页 |
| ·ApxⅣ单克隆抗体的特异性 | 第99-100页 |
| ·ApxⅣ单克隆抗体识别表位分析 | 第100页 |
| ·小结 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 附录 | 第118页 |
