| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 口蹄疫病毒VP1基因C末端串连表达及其抗体ELISA方法的初步建立 | 第9-31页 |
| 1 文献综述 | 第9-16页 |
| ·口蹄疫及其危害 | 第9页 |
| ·口蹄疫病毒分子生物学进展 | 第9-12页 |
| ·非编码区(UTR) | 第10页 |
| ·开放阅读框(ORF) | 第10-12页 |
| ·结构蛋白基因 | 第10-11页 |
| ·非结构蛋白基因 | 第11-12页 |
| ·口蹄疫诊断技术及研究进展 | 第12-14页 |
| ·临床诊断 | 第12页 |
| ·病毒学诊断 | 第12-13页 |
| ·病毒分离 | 第12-13页 |
| ·免疫学方法 | 第13页 |
| ·核酸水平上的检测 | 第13页 |
| ·野外检测法 | 第13页 |
| ·血清学检测方法 | 第13-14页 |
| ·结构蛋白抗体的检测 | 第13-14页 |
| ·非结构蛋白抗体的检测 | 第14页 |
| ·展望 | 第14页 |
| ·口蹄疫防制 | 第14-15页 |
| ·口蹄疫疫苗研究进展 | 第15-16页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-23页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·菌株、质粒和载体 | 第17页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第17页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第17-18页 |
| ·血清 | 第18页 |
| ·试验动物 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-23页 |
| ·PCR扩增VP1基因C末端基因 | 第19页 |
| ·PCR产物的鉴定 | 第19页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第19页 |
| ·连接产物的转化 | 第19页 |
| ·PCR产物的回收 | 第19页 |
| ·PCR产物克隆至T载体 | 第19-20页 |
| ·质粒的少量制备(碱裂解法) | 第20页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法)及PEG纯化 | 第20页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第20-21页 |
| ·重组质粒的快速鉴定(PCR) | 第20页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第20-21页 |
| ·重组质粒测序 | 第21页 |
| ·表达质粒的构建 | 第21页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)的诱导表达 | 第21-22页 |
| ·小量诱导 | 第21页 |
| ·大量诱导 | 第21-22页 |
| ·表达蛋白的鉴定 | 第22页 |
| ·SDS-PAGE | 第22页 |
| ·Western-blot | 第22页 |
| ·表达蛋白的提取、变性与复性 | 第22页 |
| ·最佳包被度和最佳血清稀释度的确定(方阵滴定) | 第22-23页 |
| ·ELISA方法初步建立 | 第23页 |
| ·ELISA阴阳性界限的确定 | 第23页 |
| ·特异性试验 | 第23页 |
| ·重复性试验 | 第23页 |
| ·动物试验 | 第23页 |
| 4 结果与分析 | 第23-29页 |
| ·口蹄疫C末端VP1基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·C末端VP1克隆到T-Vector及其方向的酶切 | 第24页 |
| ·C末端VP1基因的序列分析 | 第24页 |
| ·表达重组质粒的构建及鉴定结果 | 第24-25页 |
| ·VP1及2VP1基因的表达及检测 | 第25页 |
| ·最佳包被度和最佳血清稀释度的确定(方阵滴定) | 第25-27页 |
| ·VP1-ELISA阴阳界限的确定结果 | 第27页 |
| ·特异性试验 | 第27页 |
| ·重复性试验 | 第27页 |
| ·检测血清样品结果 | 第27-28页 |
| ·动物实验结果 | 第28-29页 |
| 5 讨论 | 第29页 |
| 6 结论 | 第29-31页 |
| 第二章 梅山猪α／β干扰素的克隆、定点诱变及原核表达 | 第31-44页 |
| 1 干扰素文献综述 | 第31-34页 |
| ·概述及历史 | 第31页 |
| ·猪干扰素及其基因结构 | 第31-32页 |
| ·干扰素作用机理 | 第32-34页 |
| ·干扰素作用特点 | 第32页 |
| ·干扰素主要生物学功能 | 第32-33页 |
| ·干扰素抗病毒机理 | 第33-34页 |
| 2 研究目的和意义 | 第34页 |
| 3 材料与方法 | 第34-37页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第35页 |
| ·引物 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-37页 |
| ·猪白细胞基因组的提取 | 第35-36页 |
| ·克隆与测序 | 第36页 |
| ·α／β干扰素的定点诱变 | 第36页 |
| ·原核表达质粒pGEX-IFNβ、pGEX-IFNα的构建 | 第36-37页 |
| ·IFN-α／β的诱导表达 | 第37页 |
| ·包涵体的提取 | 第37页 |
| ·IFN-β抑制病毒活性的检测 | 第37页 |
| 4 结果与分析 | 第37-42页 |
| ·猪IFN-α／β的克隆 | 第37-38页 |
| ·猪α／β干扰素测序结果及序列分析 | 第38-40页 |
| ·α／β干扰素定点诱变 | 第40页 |
| ·表达质粒pGEX-IFNβ、pGEX-IFNα鉴定 | 第40-41页 |
| ·猪IFN-α／β的表达与纯化 | 第41-42页 |
| ·猪IFN-β活性测定结果 | 第42页 |
| 5 讨论 | 第42-44页 |
| ·MS-IFNα／β基因克隆及序列分析 | 第42页 |
| ·干扰索定点诱变 | 第42-43页 |
| ·干扰素与GST融合表达 | 第43页 |
| ·干扰素活性测定 | 第43页 |
| ·干扰素研究展望 | 第43-44页 |
| 6 结论 | 第44页 |
| 参考文献 | 第44-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录1 | 第56-57页 |
| 附录2 | 第57页 |
