| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstranct | 第4-9页 |
| 0 前言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-34页 |
| ·概述 | 第10页 |
| ·磷脂酶A_2的一般性质 | 第10-12页 |
| ·磷脂酶A_2结构特征 | 第12-15页 |
| ·蛇毒PLA_2的功能 | 第15-17页 |
| ·PLA_2的酶活性 | 第15页 |
| ·PLA_2的药理活性 | 第15-17页 |
| ·催化机理 | 第17-18页 |
| ·磷脂酶A_2的应用 | 第18-21页 |
| ·用PLA_2研究酶学、脂代谢和生物膜结构与功能 | 第18-19页 |
| ·用PLA_2生产溶血磷脂和不饱和脂肪酸 | 第19-20页 |
| ·用PLA_2进行植物油脱胶 | 第20页 |
| ·PLA_2在动物饲料中的应用 | 第20页 |
| ·PLA_2在医疗方面应用 | 第20-21页 |
| ·蛇毒PLA_2的基因工程研究 | 第21-26页 |
| ·蛇毒PLA_2的基因工程研究现状 | 第21-23页 |
| ·可溶性表达策略 | 第23-24页 |
| ·表达载体的选择 | 第24-26页 |
| ·优化培养及表达条件 | 第26页 |
| ·生物大分子分离纯化方法 | 第26-28页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第26-27页 |
| ·离子交换层析 | 第27页 |
| ·疏水作用层析 | 第27页 |
| ·金属离子亲和层析 | 第27-28页 |
| ·本论文的工作 | 第28页 |
| 参考文献 | 第28-34页 |
| 2 Gln49-PLA_2基因的克隆与序列分析 | 第34-51页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·材料、培养基 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-42页 |
| ·总RNA提取 | 第36页 |
| ·3'-RACE扩增磷脂酶A_23'端序列 | 第36-38页 |
| ·RT-PCR扩增磷脂酶A_2编码区序列 | 第38-39页 |
| ·PCR产物的回收 | 第39-40页 |
| ·目的基因的A-T克隆 | 第40页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·转化 | 第41页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第41-42页 |
| ·DNA测序和序列分析 | 第42页 |
| ·Gln49-PLA_2的三级结构模拟 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-49页 |
| ·Gln49-PLA_2基因的克隆 | 第42-46页 |
| ·Gln49-PLA2的序列分析 | 第46-47页 |
| ·Gln49-PLA_2的空间结构分析 | 第47-49页 |
| ·小结 | 第49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 3 Gln49-PLA_2基因在大肠杆菌中的表达和条件优化 | 第51-74页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51-53页 |
| ·菌株与质粒 | 第51-52页 |
| ·主要仪器 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·引物的设计与合成 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-64页 |
| ·长白山白眉蝮蛇碱性PLA_2表达载体的构建 | 第53-60页 |
| ·碱性PLA_2在大肠杆菌中的表达 | 第60-63页 |
| ·蛋白表达的条件优化 | 第63-64页 |
| ·实验结果与讨论 | 第64-71页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第64-68页 |
| ·蛇毒碱性PLA_2的表达与鉴定 | 第68-69页 |
| ·表达条件的优化 | 第69-70页 |
| ·诱导温度的影响 | 第70-71页 |
| ·诱导时间对蛋白表达的影响 | 第71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 4 融合蛋白的分离纯化与性质 | 第74-88页 |
| ·引言 | 第74页 |
| ·实验材料 | 第74-75页 |
| ·试验仪器 | 第74-75页 |
| ·试验试剂 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-80页 |
| ·蛋白组分的制备 | 第75页 |
| ·固定化金属亲和层析 | 第75-76页 |
| ·阴离子交换层析 | 第76-77页 |
| ·疏水层析 | 第77页 |
| ·蛋白浓度的确定 | 第77-78页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第78页 |
| ·蛋白质免疫印记 | 第78-79页 |
| ·抗凝血活性的测定 | 第79-80页 |
| ·细胞毒活性的测定 | 第80页 |
| ·结果与讨论 | 第80-86页 |
| ·可溶组分的纯化 | 第80-84页 |
| ·重组蛋白的生化性质 | 第84-86页 |
| ·小结 | 第86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 5 结论与展望 | 第88-90页 |
| ·结论 | 第88页 |
| ·创新点 | 第88-89页 |
| ·展望 | 第89-90页 |
| 硕士期间发表的论文及专利申请情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附录Ⅰ | 第92-94页 |
| 附录Ⅱ | 第94-96页 |