| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 引言 | 第7-21页 |
| ·脂肪酸的简介 | 第7-8页 |
| ·脂肪酸脱氢酶(FATTY ACID DESATURASE)的简介 | 第8-10页 |
| ·花生四烯酸的简介 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌表达系统的研究进展 | 第11-16页 |
| ·大肠杆菌表达系统的特点 | 第12-13页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的高效表达原理 | 第13-14页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的高效表达策略 | 第14-16页 |
| ·应用前景及展望 | 第16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第16-21页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统简介 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第17页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第17-18页 |
| ·巴斯德毕赤酵母高水平表达策略 | 第18-20页 |
| ·应用前景及展望 | 第20-21页 |
| 第二章 深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因的克隆及分析 | 第21-31页 |
| ·材料与方法 | 第21-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·培养基及溶液的配置 | 第21-22页 |
| ·主要仪器与设备 | 第22-23页 |
| ·引物 | 第23页 |
| ·菌种活化及培养 | 第23页 |
| ·深黄被孢霉总 RNA 的提取 | 第23页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因 cDNA 的合成 | 第23-24页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因的扩增 | 第24页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因 PCR 产物的电泳分析 | 第24页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因的回收与纯化 | 第24-25页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因的连接 | 第25页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第25页 |
| ·△6 脂肪酸脱氢酶基因重组质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶重组质粒的鉴定 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-29页 |
| ·深黄被孢霉总 RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因的 PCR 扩增结果 | 第27页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因重组质粒的 PCR 鉴定结果 | 第27-28页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因重组质粒的酶切鉴定结果 | 第28页 |
| ·深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因的测序结果分析 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 第三章 深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶在大肠杆菌中的表达 | 第31-41页 |
| ·材料与方法 | 第31-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要溶液 | 第31-34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-37页 |
| ·重组质粒和表达载体的双酶切 | 第34-35页 |
| ·△6 脂肪酸脱氢酶基因以及表达载体的回收与纯化 | 第35页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第35页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态 | 第35页 |
| ·重组表达质粒的提取 | 第35页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组表达质粒转化表达宿主菌 | 第36页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达以及 SDS-PAGE 分析 | 第36-37页 |
| ·表达产物的 Western bloting 鉴定 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的双酶切 | 第37-38页 |
| ·表达宿主菌的菌液 PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达的 SDS-PAGE 分析 | 第38-39页 |
| ·表达产物的 WB 分析 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第四章 深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶在酵母中的表达 | 第41-49页 |
| ·材料 | 第41-43页 |
| ·菌株及质粒 | 第41页 |
| ·工具酶与试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器设备 | 第41-42页 |
| ·培养基与溶剂 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·重组质粒和表达载体的双酶切 | 第43页 |
| ·△6 脂肪酸脱氢酶基因以及表达载体的回收与纯化 | 第43页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第43页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态 | 第43页 |
| ·重组表达质粒的提取 | 第43页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组表达质粒转化表达宿主菌 | 第44页 |
| ·重组毕赤酵母 SMD1168 的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第45页 |
| ·重组蛋白的 SDS-PAGE 分析及 Western bloting 鉴定 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-47页 |
| ·pGAPZαA 重组质粒的 PCR 鉴定 | 第45-46页 |
| ·pGAPZαA 重组质粒双酶切鉴定 | 第46页 |
| ·重组毕赤酵母 SMD1168 基因组的 PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析及 Western bloting 鉴定 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第五章 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 附录 | 第57-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
