| 前言 | 第1-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-38页 |
| 综述一 隐孢子虫病免疫学研究现状 | 第12-21页 |
| 1．1 隐孢子虫的抗原成分分析 | 第12-13页 |
| 1．2 体液免疫和细胞免疫 | 第13-14页 |
| 1．3 免疫诊断 | 第14-15页 |
| 1．4 免疫防治 | 第15-21页 |
| 综述二 寄生虫核酸疫苗的研究 | 第21-38页 |
| 2．1 核酸疫苗的研究概况 | 第21-23页 |
| 2．2 核酸疫苗的主要优点 | 第23-24页 |
| 2．3 核酸免疫的生物学特征 | 第24-25页 |
| 2．4 核酸疫苗的构建 | 第25页 |
| 2．5 影响核酸疫苗免疫效果的主要因素 | 第25-29页 |
| 2．6 核酸疫苗的免疫机理 | 第29-30页 |
| 2．7 核酸疫苗抗寄生虫感染 | 第30-31页 |
| 2．8 核酸疫苗的应用及其前景展望 | 第31-38页 |
| 第二章 隐孢子虫保护性抗原基因的克隆和序列分析 | 第38-55页 |
| 1 材料和方法 | 第38-42页 |
| 1．1 材料 | 第38-39页 |
| 1．2 方法 | 第39-42页 |
| 1．2．1 卵囊的分离和纯化 | 第39页 |
| 1．2．2 微小隐孢子虫基因组DNA的提取 | 第39页 |
| 1．2．3 引物的设计和合成 | 第39-40页 |
| 1．2．4 PCR | 第40页 |
| 1．2．5 连接 | 第40页 |
| 1．2．6 重组DNA的转化 | 第40-41页 |
| 1．2．7 质粒的小量制备 | 第41页 |
| 1．2．8 重组质粒的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 1．2．9 琼脂糖凝胶电泳 | 第42页 |
| 1．2．10 扩增片段测序和序列分析 | 第42页 |
| 2 结果 | 第42-51页 |
| 2．1 保护性抗原基因的PCR扩增 | 第42-43页 |
| 2．2 重组质粒的酶切鉴定 | 第43-45页 |
| 2．3 基因的核苷酸序列分析 | 第45-48页 |
| 2．4 推测的氨基酸序列分析 | 第48-50页 |
| 2．5 抗原决定簇分析 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 3．1 卵囊的纯化 | 第51-52页 |
| 3．2 抗原基因的选择 | 第52页 |
| 3．3 目的基因的扩增 | 第52-53页 |
| 4 小结 | 第53-55页 |
| 第三章 蛋白为抗原建立检测抗隐孢子虫抗体间接ELISA方法的研究 | 第55-70页 |
| 1 材料与方法 | 第55-61页 |
| 1．1 材料 | 第55-56页 |
| 1．2 方法 | 第56-61页 |
| 1．2．1 原核表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 1．2．2 重组质粒在大肠杆菌中表达及鉴定 | 第58-59页 |
| 1．2．3 间接ELISA方法的建立 | 第59-61页 |
| 2 结果 | 第61-67页 |
| 2．1 表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 2．2 重组质粒的表达与鉴定 | 第62-64页 |
| 2．3 间接ELISA反应条件的确定 | 第64-66页 |
| 2．4 特异性实验 | 第66页 |
| 2．5 重复性实验 | 第66-67页 |
| 2．6 实验样品的检测 | 第67页 |
| 3 讨论 | 第67-68页 |
| 3．1 表达系统的选择 | 第67-68页 |
| 3．2 关于隐孢子虫病检测方法 | 第68页 |
| 4 小结 | 第68-70页 |
| 第四章 隐孢子虫核酸疫苗表达质粒的构建与表达 | 第70-82页 |
| 1 材料与方法 | 第70-74页 |
| 1．1 材料 | 第70页 |
| 1．2 载体构建 | 第70-72页 |
| 1．2．1 质粒的大量制备 | 第71页 |
| 1．2．2 限制性内切酶水解反应 | 第71页 |
| 1．2．3 DEAE-81纤维素膜电泳回收法 | 第71页 |
| 1．2．4 线性质粒DNA 5’端去磷酸化 | 第71-72页 |
| 1．2．5 外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第72页 |
| 1．2．6 重组质粒的鉴定 | 第72页 |
| 1．2．7 质粒DNA定量技术 | 第72页 |
| 1．3 转染Hela细胞 | 第72-73页 |
| 1．3．1 细胞培养和质粒制备 | 第72-73页 |
| 1．3．2 细胞转染 | 第73页 |
| 1．4 重组质粒的表达分析 | 第73-74页 |
| 1．4．1 Hela细胞中mRNA的检测 | 第73-74页 |
| 1．4．2 ELISA检测 | 第74页 |
| 1．4．3 免疫荧光 | 第74页 |
| 2 结果 | 第74-79页 |
| 2．1 真核表达载体的构建 | 第74-75页 |
| 2．2 转染的Hela细胞中mRNA的检测结果 | 第75-77页 |
| 2．3 表达产物ELISA检测结果 | 第77-79页 |
| 2．4 间接免疫荧光 | 第79页 |
| 3 讨论 | 第79-81页 |
| 3．1 核酸疫苗的构建 | 第79-80页 |
| 3．2 核酸疫苗在体外哺乳动物细胞中的表达和检测 | 第80-81页 |
| 4 小结 | 第81-82页 |
| 第五章 核酸疫苗免疫BALB／c小鼠的实验免疫研究 | 第82-104页 |
| 1 材料与方法 | 第82-86页 |
| 1．1 材料 | 第82-83页 |
| 1．2 方法 | 第83-86页 |
| 1．2．1 动物分组与免疫 | 第83页 |
| 1．2．2 E玫瑰花环形成实验 | 第83-84页 |
| 1．2．3 淋巴细胞转化实验 | 第84页 |
| 1．2．4 T淋巴细胞亚类检测 | 第84页 |
| 1．2．5 外周血淋巴细胞CTL反应 | 第84-85页 |
| 1．2．6 体液免疫水平的检测 | 第85页 |
| 1．2．7 IFN-γ、IL-2及NO检测 | 第85页 |
| 1．2．8 小肠粘膜IgA抗体生成细胞的检测 | 第85-86页 |
| 1．2．9 疫苗质粒在免疫鼠中的存留情况 | 第86页 |
| 1．2．10 保护性实验 | 第86页 |
| 1．3 统计学处理 | 第86页 |
| 2 结果 | 第86-99页 |
| 2．1 E-玫瑰花环形成实验 | 第86-87页 |
| 2．2 特异性淋巴细胞转化实验 | 第87-88页 |
| 2．3 CD_4~+ CD_8~+ T淋巴细胞数量变化 | 第88-90页 |
| 2．4 CTL活性实验 | 第90页 |
| 2．5 血清中IgG和IgA的消长 | 第90-92页 |
| 2．6 小肠粘膜固有层中IgA分泌型浆细胞的消长 | 第92-93页 |
| 2．7 各组小鼠脾脏的大小比较 | 第93-94页 |
| 2．8 免疫鼠血清IFN-γ检测结果 | 第94页 |
| 2．9 免疫鼠血清IL-2检测结果 | 第94-95页 |
| 2．10 免疫鼠血清NO分子检测结果 | 第95-96页 |
| 2．11 核酸疫苗质粒免疫小鼠体内基因的存留情况 | 第96页 |
| 2．12 动物保护性实验 | 第96-99页 |
| 3 讨论 | 第99-102页 |
| 3．1 载体设计对免疫效果的影响 | 第99页 |
| 3．2 核酸疫苗导入方法对免疫效果的影响 | 第99-101页 |
| 3．3 包裹介质对免疫效果的影响 | 第101页 |
| 3．4 影响核酸疫苗免疫效果的其它因素 | 第101页 |
| 3．5 核酸疫苗对细胞因子和NO的影响 | 第101-102页 |
| 3．6 核酸疫苗免疫母鼠所产仔鼠的免疫状态 | 第102页 |
| 4 小结 | 第102-104页 |
| 第六章 隐孢子虫核酸疫苗对山羊的免疫保护性实验 | 第104-115页 |
| 1 材料和方法 | 第104-106页 |
| 1．1 材料 | 第104页 |
| 1．2 方法 | 第104-106页 |
| 1．2．1 山羊隐孢子虫病实验模型的建立 | 第105页 |
| 1．2．2 分组及免疫 | 第105页 |
| 1．2．3 保护性实验 | 第105页 |
| 1．2．4 抗体反应 | 第105页 |
| 1．2．5 小肠粘膜IgA抗体生成细胞的检测 | 第105-106页 |
| 1．3 统计分析 | 第106页 |
| 2 结果 | 第106-111页 |
| 2．1 山羊隐孢子虫病模型的建立 | 第106-108页 |
| 2．1．1 临床症状 | 第106-107页 |
| 2．1．2 病理变化 | 第107-108页 |
| 2．2 母畜的血浆和初乳反应 | 第108-109页 |
| 2．3 保护性实验 | 第109-110页 |
| 2．4 小肠粘膜固有层中IgA分泌型浆细胞 | 第110-111页 |
| 3 讨论 | 第111-113页 |
| 3．1 隐孢子虫动物模型的建立 | 第111-112页 |
| 3．2 核酸疫苗对山羊的免疫保护作用 | 第112-113页 |
| 3．3 核酸疫苗防治隐孢子虫病存在问题和前景展望 | 第113页 |
| 4 小结 | 第113-115页 |
| 第七章 结论 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 英文摘要 | 第117-120页 |
| 个人简历 | 第120-122页 |
| 附录 | 第122-129页 |
| 附录Ⅰ | 第122-127页 |
| 附录Ⅱ | 第127-129页 |
