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骨形成蛋白-7基因修饰的骨髓间充质干细胞对肾缺血再灌注损伤修复作用的实验研究

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-14页
第1章 引言第14-17页
第2章 大鼠MSCs 的分离、培养及生物学特性研究第17-29页
   ·实验材料第18-20页
     ·实验动物第18页
     ·主要仪器与产地第18-19页
     ·主要试剂与产地第19页
     ·试剂的配制第19-20页
   ·实验方法第20-22页
     ·MSCs 的分离和培养第20-21页
     ·MSCs 的活性测定第21页
     ·MSCs 的鉴定第21-22页
   ·结果第22-24页
     ·MSCs 的原代培养第22页
     ·MSCs的传代培养第22-23页
     ·MSCs 的生长曲线及鉴定第23-24页
   ·讨论第24-29页
     ·MSCs 自我更新及多向分化潜能第24-25页
     ·MSCs的异质性第25-26页
     ·MSCs 的分离方法第26-27页
     ·MSCs 的生长特性第27-29页
第3章 BMP7 基因转染MSCs 的研究第29-48页
   ·实验材料第29-31页
     ·主要仪器与产地第29-30页
     ·主要试剂与产地第30页
     ·试剂的配制第30-31页
   ·实验方法第31-38页
     ·BMP-7 慢病毒载体的构建第31-35页
     ·病毒感染细胞第35-36页
     ·重组蛋白表达检测第36-38页
   ·结果第38-42页
     ·BMP-7 慢病毒载体构建成功第38-41页
     ·病毒成功转染大鼠 MSCs第41页
     ·重组 MSCs 表达 BMP7第41-42页
   ·讨论第42-48页
     ·载体的选择第42-45页
     ·标记方法的选择第45-46页
     ·靶细胞的选择第46-48页
第4章 BMP7 基因修饰的 MSCs 对肾 IRI 修复作用的研究第48-101页
   ·实验材料第48-53页
     ·实验动物和分组第48-49页
     ·主要仪器与产地第49-50页
     ·主要试剂与产地第50-51页
     ·试剂的配制第51-53页
   ·实验方法第53-66页
     ·实验流程第53页
     ·大鼠MSCs的分离和培养第53页
     ·BMP-7 慢病毒载体的构建第53页
     ·携带BMP-7的慢病毒(表达GFP)感染大鼠MSCs第53页
     ·肾脏IRI大鼠模型的建立及MSCs移植第53-54页
     ·大鼠肾脏标本的获取第54-55页
     ·上皮钙粘蛋白(E-cadherin)免疫组织化学染色检查第55-56页
     ·5-溴脱氧尿核苷(BrdU)免疫组织化学染色检查第56-57页
     ·波形蛋白(Vimentin)免疫组织化学染色检查第57页
     ·α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色检查第57-58页
     ·胶原纤维 VG 染色第58-59页
     ·上皮钙粘蛋白(E-cadherin)mRNA 含量的 RT-PCR 检测第59-60页
     ·波形蛋白(Vimentin)m RNA 含量的RT-PCR 检测第60-62页
     ·α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)m RNA 含量的 RT-PCR检测第62-64页
     ·骨形成蛋白7(BMP7)m RNA 含量的 RT-PCR检测第64-66页
     ·统计学分析第66页
   ·结果第66-90页
     ·BMP7 基因修饰的重组MSCs(表达GFP)构建成功第66页
     ·大鼠肾脏 IRI 模型的建立成功第66-69页
     ·外源MSCs 、BMP7-MSCs 于肾IRI 后在肾组织的分布状况第69-71页
     ·外源MSCs 、BMP7-MSCs在肾IRI后定向分化为肾小管上皮细胞的情况第71-72页
     ·外源MSCs 、BMP7-MSCs 对肾IRI 后肾功能的影响第72-76页
     ·外源MSCs 、BMP7-MSCs对肾IRI后肾脏细胞增殖情况的影响第76-80页
     ·外源MSCs 、BMP7-MSCs 对肾IRI 后肾间质纤维化的影响第80-88页
     ·外源MSCs 、BMP7-MSCs 对肾IRI 后肾组织BMP7 表达的影响第88-90页
   ·讨论第90-101页
     ·肾功能衰竭的治疗概况第90-91页
     ·BMP7 与肾第91-92页
       ·BMP-7 的分布第91页
       ·BMP-7 与肾脏发育第91页
       ·BMP-7 对肾小管上皮细胞表型的维持第91-92页
       ·BMP-7 对细胞外基质降解的促进作用第92页
       ·BMP-7对炎症反应的抑制第92页
     ·外源性 MSCs、BMP7-MSCs 向 IRI 肾脏趋向转移的情况第92-95页
       ·MSCs 的“归巢”特性第92-94页
       ·BMP7-MSCs 在肾 IRI 后的“归巢”第94-95页
     ·BMP7 对外源性MSCs 在肾IRI 后向肾小管细胞定向分化的影响第95-97页
       ·MSCs的多向分化潜能第95页
       ·外源性MSCs、BMP7-MSCs在肾IRI后向肾细胞定向分化、修复损伤的情况第95-97页
     ·外源性MSCs、BMP7-MSCs对肾IRI后细胞增殖的影响第97页
     ·外源性MSCs、BMP7-MSCs对肾IRI后间质纤维化的影响第97-99页
       ·BMP-7 对肾IRI 后间质纤维化的影响第98页
       ·外源MSCs 对肾IRI 后间质纤维化的影响第98页
       ·BMP7-MSCs 对肾 IRI 后间质纤维化的影响第98-99页
     ·肾IRI大鼠模型建立的经验总结第99-101页
第5章 结论与展望第101-102页
   ·结论第101页
   ·展望第101-102页
致谢第102-103页
参考文献第103-114页
附录A BMP7 基因信息第114-117页
附录B 综述第117-125页
符彦基攻读学位期间的研究成果第125页

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