| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·1,3-丙二醇的性质 | 第11页 |
| ·化学法生产1,3-丙二醇 | 第11-12页 |
| ·环氧乙烷羰基化法 | 第11页 |
| ·丙烯醛水合法 | 第11页 |
| ·其它合成方法 | 第11-12页 |
| ·微生物法生产1,3-丙二醇 | 第12页 |
| ·甘油歧化1,3-丙二醇的代谢过程 | 第12-17页 |
| ·甘油歧化过程中的关键酶 | 第13-16页 |
| ·甘油歧化途径的改造 | 第16-17页 |
| ·利用基因工程菌生产1,3-丙二醇 | 第17-21页 |
| ·dha 调节子 | 第17-19页 |
| ·基因工程菌的构建策略 | 第19-21页 |
| ·微氧发酵 | 第21-22页 |
| ·辅酶NADH 再生研究进展 | 第22-23页 |
| ·辅酶的电化学法再生 | 第22页 |
| ·辅酶的酶法再生 | 第22-23页 |
| ·1,3-丙二醇的提取和纯化 | 第23页 |
| ·论文研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·材料 | 第25-29页 |
| ·仪器 | 第25-26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·菌种、质粒及引物 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-29页 |
| ·酶和试剂盒 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-37页 |
| ·引物设计和PCR 扩增 | 第29页 |
| ·DNA 产物的回收 | 第29-30页 |
| ·连接与转化 | 第30页 |
| ·质粒的提取 | 第30页 |
| ·DNA 酶切 | 第30页 |
| ·DNA 测序 | 第30页 |
| ·两亲本杂交—接合 | 第30-31页 |
| ·菌体培养液浊度及菌体浓度的测定 | 第31页 |
| ·发酵液甘油、1,3-丙二醇和副产物的测定方法-HPLC 法 | 第31-34页 |
| ·重组菌甲酸脱氢酶活力测定 | 第34页 |
| ·质粒稳定性的测定方法 | 第34页 |
| ·蛋白质的测定方法 | 第34-35页 |
| ·热击用大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·蛋白质的SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶活性的测定 | 第36-37页 |
| 第3章 NADH 再生系统的构建及PARDE 对其稳定性的影响 | 第37-47页 |
| 引言 | 第37-38页 |
| ·NADH 再生系统在K.OXYTOCA M5AL 中的构建 | 第38-41页 |
| ·PCR 引物设计 | 第38-39页 |
| ·甲酸脱氢酶基因的获取 | 第39页 |
| ·中间载体pMD18-T Simple-fdh 的构建和鉴定 | 第39-40页 |
| ·NADH 再生系统在K.oxytoca 中的构建和鉴定 | 第40-41页 |
| ·质粒平均分配基因 PARDE 对NADH 再生系统稳定性影响 | 第41-46页 |
| ·重组质粒的构建 | 第41-44页 |
| ·不同重组质粒在产酸克氏杆菌中的稳定性 | 第44-45页 |
| ·重组菌株传代后fdh 基因的表达 | 第45页 |
| ·重组菌株传代后甲酸脱氢酶活性的变化 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第4章 NADH 再生系统对1,3-丙二醇合成的影响 | 第47-60页 |
| 引言 | 第47页 |
| ·甲酸脱氢酶在重组菌F6 中表达及酶活的测定 | 第47-48页 |
| ·甲酸钠的添加对1,3-丙二醇合成的影响 | 第48-56页 |
| ·添加与不添加甲酸钠对1,3-丙二醇合成的影响 | 第49-51页 |
| ·添加pH 5.2 和pH 7.0 甲酸钠溶液对1,3-丙二醇合成的影响 | 第51-53页 |
| ·不同时间添加甲酸钠对对1,3-丙二醇合成的影响 | 第53-56页 |
| ·NADH 再生系统对1,3-丙二醇合成的影响 | 第56-58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第5章 乙醇途径敲除突变株的构建及鉴定 | 第60-76页 |
| 引言 | 第60-61页 |
| ·构建ADHE 和ALDH 基因敲除菌的思路 | 第61-62页 |
| ·与辅酶NADH 相关的K.oxytoca 代谢网络分析 | 第61页 |
| ·K. oxytoca 中乙醇合成途径分析 | 第61-62页 |
| ·自杀载体与染色体同源双交换原理 | 第62-63页 |
| ·ADHE 基因和ALDH 上下两臂基因的扩增 | 第63-66页 |
| ·adhE 基因的扩增 | 第64-65页 |
| ·aldH 上下两臂基因的扩增 | 第65-66页 |
| ·PCR 产物的克隆及测序 | 第66-67页 |
| ·自杀载体的构建 | 第67-72页 |
| ·自杀载体pKEG 的构建 | 第67-70页 |
| ·自杀载体pCHG 的构建 | 第70-72页 |
| ·突变株的筛选 | 第72-73页 |
| ·突变株的鉴定 | 第73-75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| 第6章 突变株生成乙醇和1,3-丙二醇的变化 | 第76-84页 |
| ·ALDH 缺失突变株（MH）和ADHE 缺失突变株(ME)比酶活的测定 | 第76页 |
| ·ALDH 缺失突变株（MH）和ADHE 缺失突变株(ME)乙醇的产生 | 第76-77页 |
| ·ALDH 缺失突变株（MH）和ADHE 缺失突变株(ME)1,3-丙二醇的生成 | 第77-82页 |
| ·第I 批发酵实验 | 第77-80页 |
| ·第II 批发酵实验 | 第80-82页 |
| ·ALDH 突变株（MH）和ADHE 缺失突变株(ME)厌氧发酵乙醇的生成 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 第7章 结论与展望 | 第84-86页 |
| ·结论 | 第84-85页 |
| ·展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 附录 | 第94-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 作者简介 | 第98-99页 |
| 导师评阅表 | 第99页 |
