| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-36页 |
| 1 植物次生代谢途径转录因子的基本概念 | 第12-14页 |
| ·次生代谢概念 | 第12-13页 |
| ·植物次生代谢调节 | 第13页 |
| ·植物次生代谢的转录因子的调控研究 | 第13-14页 |
| 2 植物次生代谢工程的研究策略 | 第14-17页 |
| ·导入单个或多个靶基因 | 第14-15页 |
| ·反义RNA和RNAi干涉 | 第15页 |
| ·改变分叉代谢途径的流向 | 第15-16页 |
| ·信号分子的引入 | 第16页 |
| ·转录因子基因的表达调节 | 第16-17页 |
| 3 植物转录因子的研究 | 第17-21页 |
| ·植物转录因子的结构与功能 | 第17-20页 |
| ·植物次生代谢转录因子的分离与鉴定 | 第20-21页 |
| 4 植物的次生代谢途径中的转录因子研究 | 第21-33页 |
| ·苯丙氨酸代谢途径中的转录因子 | 第22-25页 |
| ·萜类合成代谢途径中的转录因子 | 第25-33页 |
| 5 转录因子功能研究的新方法—原子力显微镜(Amotic Force Microscope AFM) | 第33-36页 |
| 第二章 酵母单杂交(Yeast One-Hybrid)方法筛选东北红豆杉(Taxus cuspidata)中与甲基茉莉酸诱导相关的转录因子研究 | 第36-77页 |
| 前言 | 第36-37页 |
| 1 材料与方法 | 第37-50页 |
| ·植物材料及诱导培养 | 第37页 |
| ·菌株和载体 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·试剂和培养基 | 第38-40页 |
| ·实验方法 | 第40-50页 |
| 2 结果与讨论 | 第50-75页 |
| ·建库诱导时间的确定 | 第50-54页 |
| ·东北红豆杉ds cDNA文库的构建和均一化处理 | 第54-57页 |
| ·酵母单杂交系统的建立 | 第57-58页 |
| ·酵母文库的筛选 | 第58-61页 |
| ·筛选获得的putative转录因子片段 | 第61-62页 |
| ·东北红豆杉AP2转录因子基因全长cDNA的获得及分析 | 第62-67页 |
| ·TcAP2基因的分子进化分析 | 第67-71页 |
| ·TcAP2的二维结构分析 | 第71-72页 |
| ·TcAP2的DNA结合域结构分析 | 第72-73页 |
| ·TcAP2三维结构及功能域的预测与分析 | 第73-74页 |
| ·TcAP2基因的Southern blot分析 | 第74-75页 |
| 3 小结 | 第75-77页 |
| 第三章 东北红豆杉中与异戊二烯代谢途径相关的TCDREB转录因子基因的克隆 | 第77-91页 |
| 1 材料与准备 | 第77-78页 |
| ·植物材料及诱导 | 第77页 |
| ·菌株和载体 | 第77页 |
| ·酶与试剂盒 | 第77页 |
| ·引物 | 第77-78页 |
| 2 方法 | 第78-80页 |
| ·东北红豆杉总RNA的抽提及质量检测 | 第78页 |
| ·东北红豆杉总DNA的抽提及质量检测 | 第78页 |
| ·DNA片段的回收、连接、克隆和测序 | 第78页 |
| ·TcDREB目的基因的克隆 | 第78-79页 |
| ·TcDREB基因的Southern blotting分析 | 第79页 |
| ·生物信息学分析 | 第79-80页 |
| 3 结果与讨论 | 第80-90页 |
| ·TcDREB全长cDNA的获得及分析 | 第80-81页 |
| ·TcDREB编码区推导的蛋白序列性质分析 | 第81-83页 |
| ·TcDREB转录因子的叶绿体前导肽分析 | 第83页 |
| ·TcDREB Homolog的序列比对和分析 | 第83-84页 |
| ·TcDREB的分子进化分析 | 第84-85页 |
| ·TcDREB的二维结构和拓扑学结构分析 | 第85-88页 |
| ·TcDREB的功能域和三维结构预测分析 | 第88页 |
| ·TcDREB基因的Southern blot分析 | 第88-90页 |
| 4 小结 | 第90-91页 |
| 第四章 与红豆杉异戊二烯代谢途径相关的AP2转录因子的功能分析 | 第91-126页 |
| 1 材料 | 第91-95页 |
| ·植物材料 | 第91页 |
| ·菌株和载体 | 第91页 |
| ·试剂 | 第91-94页 |
| ·仪器和设备 | 第94-95页 |
| 2 方法 | 第95-102页 |
| ·His-TcAP2和His-TcDREB融合蛋白的诱导表达、纯化和复性 | 第95-96页 |
| ·TcAP2∷GFP和TcDREB∷GFP融合蛋白在洋葱细胞表皮的亚细胞定位 | 第96-97页 |
| ·TcAP2基因和TcDREB基因的表达谱分析 | 第97页 |
| ·TcAP2基因和TcDREB基因的逆境表达模式分析 | 第97页 |
| ·凝胶滞后实验(EMSA) | 第97-99页 |
| ·原子力学显微法 | 第99-100页 |
| ·转录因子单转及与顺式元件共转化拟南芥 | 第100-102页 |
| 3 结果和分析 | 第102-124页 |
| ·TcAP2和TcDREB基因的原核表达及蛋白纯化 | 第102-107页 |
| ·TcAP2∷GFP和TcDREB∷GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第107-109页 |
| ·TcAP2基因和TcDREB基因组织表达的特异性 | 第109-110页 |
| ·TcAP2基因和TcDREB基因与逆境相关诱导的表达分析 | 第110-111页 |
| ·红豆杉紫杉醇合成途径中TS,5α,10β和13α启动子区的结构分析 | 第111-114页 |
| ·TcAP2和TcDREB与顺式元件结合的凝胶滞后结果 | 第114-115页 |
| ·TcAP2和TcDREB与紫杉醇合成途径中TS,5α,10β和13α启动子区的结合 | 第115-118页 |
| ·AFM法测定TcDREB与DRE元件及紫杉醇合成途径中TS、5α、10β和13α启动子区结合的单分子作用力 | 第118-121页 |
| ·TcAP2和TcDREB转录因子基因单转和共转化拟南芥 | 第121-122页 |
| ·转基因拟南芥的筛选及PCR检测 | 第122-124页 |
| 4 小结 | 第124-126页 |
| 第五章 总结与展望 | 第126-130页 |
| 1.研究总结 | 第126-128页 |
| 2.本文创新点 | 第128-129页 |
| 3.后续研究方向 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-148页 |
| 附录 | 第148-154页 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第154-155页 |
| 致谢 | 第155-156页 |
