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应用SSH技术分离克隆棉花显性无腺体基因

摘要第1-7页
Abstract第7-12页
第一章 文献综述第12-24页
   ·棉花色素腺体及棉酚的研究进展第12-17页
     ·棉花色素腺体及其多样性第12-13页
     ·棉酚的化学第13页
     ·棉酚的生物合成及代谢的分子调节第13-15页
     ·棉酚的生物合成过程中关键酶基因的克隆第15-16页
     ·棉酚腺体的遗传特性第16-17页
   ·控制棉花显性无腺体性状的基因研究进展第17-18页
     ·控制棉花无腺体性状的基因 GI_2~e第17页
     ·棉花显性无腺体基因 GI_2~e 在育种上的应用第17页
     ·棉花显性无腺体基因 GI_2~e 的分子标记第17-18页
   ·国内外低酚棉育种概况第18-19页
   ·分离植物差异表达基因的方法第19-23页
     ·mRNA 差异显示技术第19-20页
     ·基因表达的序列分析第20页
     ·cDNA 微阵列技术第20页
     ·抑制消减杂交第20-23页
       ·抑制消减杂交技术原理及技术流程第20-22页
       ·抑制消减杂交技术评价第22页
       ·抑制消减杂交技术在分离植物差异表达基因中的应用第22-23页
   ·研究的目的与意义第23-24页
第二章 抑制消减杂交法构建棉花显性无腺体 cDNA 文库第24-40页
   ·试验材料与方法第24-36页
     ·试验材料第24-27页
       ·植物材料第24页
       ·试剂盒和酶第24-25页
       ·主要试剂第25页
       ·主要仪器设备第25-26页
       ·菌株及克隆载体第26页
       ·引物序列第26-27页
     ·试验方法第27-36页
       ·总 RNA 的提取第27页
       ·总 RNA 的检测第27-28页
       ·mRNA 的分离纯化第28页
       ·抑制消减杂交第28-34页
         ·cDNA 第一链的合成第28-29页
         ·cDNA 第二链的合成第29-30页
         ·Rsa I 酶切及纯化第30页
         ·接头连接第30-31页
         ·第一次杂交第31-32页
         ·第二次杂交第32页
         ·PCR 扩增第32-34页
       ·消减文库生成第34-36页
         ·载体连接第34页
         ·转化第34-35页
         ·转化重组子的鉴定第35页
         ·文库保存第35-36页
   ·结果与分析第36-38页
     ·总 RNA 提取、mRNA 纯化及检测第36页
     ·双链cDNA(dscDNA)合成与酶切第36-37页
     ·二次 PCR 产物分析第37页
     ·消减文库中插入片段的 PCR 鉴定第37-38页
   ·讨论第38-40页
第三章 棉花显性无腺体抑制消减杂交文库的筛选及差异表达序列的分析第40-50页
   ·试验材料与方法第40-42页
     ·试验材料第40页
       ·文库材料第40页
       ·试验试剂第40页
     ·试验方法第40-42页
       ·高密度杂交膜的制备第40-41页
       ·探针标记及纯化第41页
       ·反向 Northern 杂交及显色第41-42页
       ·差异表达克隆选取第42页
       ·测序第42页
       ·差异表达 EST 生物信息学分析第42页
         ·载体和接头序列的识别与去除第42页
         ·与 NCBI 公共数据库做序列同源性比对第42页
   ·结果与分析第42-48页
     ·反向 Northern 杂交筛选结果第42-43页
     ·差异表达基因的生物信息学分析第43-48页
   ·讨论第48-50页
第四章 两个显性无腺体相关基因的克隆与序列分析第50-65页
   ·试验材料与方法第50-54页
     ·试验材料第50-51页
       ·植物材料与试验试剂第50页
       ·试验所用引物第50-51页
     ·试验方法第51-54页
       ·总 RNA 的提取第51页
       ·RACE 实验第51-54页
         ·反转录cDNA 第一链的合成第51页
         ·PCR 扩增第51-53页
         ·目的片段回收第53页
         ·回收片段连接入载体第53页
         ·转化同2.1.2.5.2第53页
         ·转化重组子鉴定第53-54页
         ·测序及序列分析第54页
   ·结果与分析第54-64页
     ·4-FA11 全长基因 RACE 及其生物信息学分析第54-60页
       ·RACE 获得4-FA11 基因序列第54-56页
       ·克隆得到的序列分析第56-60页
         ·核苷酸序列的相似性分析第56-57页
         ·推导的氨基酸序列分析第57-60页
     ·4-FA12 全长基因 RACE 及其生物信息学分析第60-64页
       ·RACE 获得4-FA12 基因序列第60-61页
       ·克隆得到的序列分析第61-64页
         ·核苷酸序列的相似性分析第61-62页
         ·推导的氨基酸序列分析第62-64页
   ·讨论第64-65页
第五章 全文结论第65-66页
参考文献第66-73页
致谢第73-74页
作者简历第74页

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