| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| ·乙烯与果实成熟衰老的关系 | 第11-12页 |
| ·ACC 氧化酶 | 第12-13页 |
| ·利用反义RNA 技术对ACC 氧化酶基因的调控 | 第13-14页 |
| ·梨再生体系研究进展 | 第14-17页 |
| ·农杆菌介导的梨遗传转化的研究进展 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 2 中梨1 号离体叶片再生体系的建立 | 第20-28页 |
| ·试验材料 | 第20-21页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·培养基和培养条件 | 第20-21页 |
| ·叶片选取与培养方法 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-22页 |
| ·基本培养基的筛选 | 第21页 |
| ·最优激素种类及浓度的筛选 | 第21页 |
| ·叶片放置方式对中梨1 号不定芽再生的影响试验 | 第21页 |
| ·暗培养时间对中梨1 号不定芽再生的影响试验 | 第21页 |
| ·AgNO_3对中梨1 号不定芽再生的影响试验 | 第21-22页 |
| ·调查指标与统计分析方法 | 第22页 |
| ·结果与分析 | 第22-25页 |
| ·基本培养基对中梨1 号不定芽再生的影响 | 第22-23页 |
| ·植物生长调节剂种类及浓度配比对中梨1 号不定芽再生的影响 | 第23-24页 |
| ·叶片放置方式对中梨1 号不定芽再生的影响 | 第24页 |
| ·暗培养时间对中梨1 号不定芽再生的影响 | 第24-25页 |
| ·AgNO_3对中梨1 号不定芽再生的影响 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-28页 |
| ·叶片不定芽再生部位具有偏好性 | 第25页 |
| ·基本培养基类型对叶片再生不定芽的影响 | 第25-26页 |
| ·生长调节物质对叶片再生不定芽的影响 | 第26页 |
| ·暗培养对叶片再生不定芽的影响 | 第26-27页 |
| ·AgNO_3添加剂对叶片再生不定芽的影响 | 第27-28页 |
| 3 中梨1 号ACC 氧化酶基因反义表达载体的构建 | 第28-40页 |
| ·试验材料 | 第28-29页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·试验方法 | 第29-35页 |
| ·中梨1 号果实总RNA 的提取和鉴定 | 第29-30页 |
| ·中梨1 号cDNA 的合成 | 第30-31页 |
| ·cDNA 的PCR 扩增 | 第31页 |
| ·目的片段的回收 | 第31-32页 |
| ·目的片段与pUCm-T Vector 连接 | 第32页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第33页 |
| ·重组质粒的提取 | 第33页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·片段测序及同源性分析 | 第34页 |
| ·反义表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·农杆菌LBA4404 感受态的制备 | 第35页 |
| ·反义表达载体转化农杆菌LBA4404 感受态细胞 | 第35页 |
| ·农杆菌工程菌株LBA4404 的鉴定 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·中梨1 号组培苗总RNA 提取结果 | 第35-36页 |
| ·电泳检测PCR 结果 | 第36页 |
| ·PCR 产物的克隆和鉴定 | 第36-37页 |
| ·PZH-f-ACO 序列分析 | 第37-38页 |
| ·目的基因片段与p81121 载体的连接 | 第38-39页 |
| ·反义表达载体向LBA4404 农杆菌的转化 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 4 农杆菌介导的ACC 氧化酶基因反义表达载体转化中梨1 号 | 第40-53页 |
| ·试验材料 | 第40页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·试验方法 | 第40-44页 |
| ·菌株的活化 | 第40-41页 |
| ·卡那霉素筛选压的确定 | 第41页 |
| ·抑菌用头孢噻肟钠（Cef）浓度的确定 | 第41页 |
| ·预培养时间的确定 | 第41页 |
| ·菌液侵染浓度的优化 | 第41页 |
| ·侵染时间的优化 | 第41-42页 |
| ·共培养时间的确定 | 第42页 |
| ·转基因苗的Kan 抗性筛选 | 第42页 |
| ·转基因苗的PCR 检测 | 第42-43页 |
| ·转基因苗的Southern-blot 检测 | 第43-44页 |
| ·调查指标 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-50页 |
| ·选择压的确定 | 第44-45页 |
| ·Cef 抑菌浓度的确定 | 第45-46页 |
| ·预培养时间对梨遗传转化的影响 | 第46-47页 |
| ·农杆菌侵染浓度对梨遗传转化的影响 | 第47页 |
| ·侵染时间对梨遗传转化的影响 | 第47-48页 |
| ·共培养时间对梨遗传转化的影响 | 第48页 |
| ·Kan 抗性苗的获得 | 第48页 |
| ·转基因植株的检测 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| ·遗传转化受体材料的类型、生理状态对遗传转化的影响 | 第50页 |
| ·预培养时间对转化率的影响 | 第50页 |
| ·菌液浓度、侵染时间及共培养时间对转化率的影响 | 第50-51页 |
| ·农杆菌菌株对抗生素的敏感性 | 第51页 |
| ·转基因植株的检测 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 | 第60-66页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
