| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-34页 |
| ·天然活性物质概述 | 第12-13页 |
| ·天然活性物质的异源表达 | 第13-22页 |
| ·异源表达的宿主选择 | 第14-18页 |
| ·异源表达的基因簇 | 第18-21页 |
| ·异源表达的问题及发展前景展望 | 第21-22页 |
| ·聚酮类化合物 | 第22-27页 |
| ·聚酮化合物及其分类 | 第22-23页 |
| ·聚酮合酶 | 第23-25页 |
| ·聚酮合酶与组合生物合成 | 第25-27页 |
| ·免疫抑制剂FK506 | 第27-29页 |
| ·FK506的理化性质 | 第27页 |
| ·FK506的生物学活性 | 第27-28页 |
| ·FK506的作用机制 | 第28页 |
| ·FK506的生物合成过程 | 第28-29页 |
| ·甲氧基丙二酰ACP(MM-ACP) | 第29-31页 |
| ·含MM-ACP的聚酮化合物 | 第29-30页 |
| ·MM-ACP的生物合成过程 | 第30-31页 |
| ·异源表达宿主E.coli BAP1 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌的丙酸盐代谢途径 | 第31页 |
| ·大肠杆菌BAP1的构建 | 第31-32页 |
| ·海洋放线菌及星海链霉菌 | 第32-33页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 2 MM-ACP合成基因簇中单个基因的克隆及表达载体的构建 | 第34-48页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·材料及设备 | 第35-37页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第35页 |
| ·主要试剂及主要溶液、培养基配制 | 第35-36页 |
| ·主要实验仪器 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·引物的设计与合成 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌感受态(CaCl_2法)的制备 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·转化子质粒的提取 | 第38-39页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳操作步骤 | 第39-40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40-45页 |
| ·目的基因的获得 | 第40-42页 |
| ·目的片段PCR产物的纯化 | 第42页 |
| ·目的片段和载体质粒的酶切、回收 | 第42-44页 |
| ·载体片段与目的基因的连接、转化 | 第44页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-47页 |
| ·目的基因的PCR扩增结果 | 第45-46页 |
| ·重组载体的鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 3 含MM-ACP合成酶基因簇的整合表达载体的构建 | 第48-65页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·材料及设备 | 第48-50页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第48页 |
| ·主要试剂及主要溶液、培养基配制 | 第48-49页 |
| ·主要实验仪器 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·Streptomyces tsukubaensis基因组的提取 | 第50页 |
| ·E.coli BAP1基因组的提取 | 第50-51页 |
| ·引物的设计与合成 | 第51-52页 |
| ·整合表达载体的构建 | 第52-59页 |
| ·目的基因的获得 | 第52-53页 |
| ·PCR产物的纯化及A尾的添加 | 第53-54页 |
| ·克隆载体的构建与序列测定 | 第54页 |
| ·含MM-ACP合成基因簇的表达载体的构建及鉴定 | 第54-56页 |
| ·整合表达载体的构建及鉴定 | 第56-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-64页 |
| ·链霉菌及大肠杆菌基因组DNA提取结果 | 第59-60页 |
| ·fkbG,fkbHK,up和down基因的PCR扩增结果 | 第60-62页 |
| ·克隆载体的测序 | 第62页 |
| ·含MM-ACP合成基因簇的表达载体pETGK的鉴定 | 第62页 |
| ·整合载体pZHGK的鉴定 | 第62-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 4 MM-ACP合成酶基因的诱导表达 | 第65-78页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·材料及设备 | 第65-67页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第65页 |
| ·主要试剂及主要溶液、培养基配制 | 第65-67页 |
| ·主要实验仪器 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67-72页 |
| ·异源表达宿主BAP1菌株的鉴定 | 第67-68页 |
| ·细胞的超声破碎操作步骤 | 第68-69页 |
| ·SDS-PAGE电泳操作步骤 | 第69页 |
| ·pETG、pETH、pETI、pETJ、pETK及pETGK表达载体在大肠杆菌BAP1中的诱导表达 | 第69-70页 |
| ·小分子蛋白FkbJ的SDS-PAGE检测 | 第70页 |
| ·FkbH蛋白的可溶性诱导表达 | 第70-72页 |
| ·结果与讨论 | 第72-76页 |
| ·异源表达宿主BAP1的鉴定 | 第72页 |
| ·pETG、pETH、pETI、pETJ、pETK及pETGK的诱导表达 | 第72-73页 |
| ·小分子蛋白FkbJ的SDS-PAGE检测 | 第73-74页 |
| ·FkbH蛋白的可溶性诱导表达 | 第74-76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 5 星海链霉菌遗传操作体系的建立 | 第78-85页 |
| ·引言 | 第78页 |
| ·材料与设备 | 第78-79页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第78页 |
| ·主要试剂及主要溶液、培养基配制 | 第78-79页 |
| ·主要实验仪器 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-82页 |
| ·产孢子培养基的筛选 | 第79-80页 |
| ·S187对不同抗生素抗性水平的检测 | 第80页 |
| ·遗传转化体系的建立 | 第80-82页 |
| ·结果与讨论 | 第82-83页 |
| ·产孢子培养基的筛选结果 | 第82页 |
| ·S187对不同抗生素抗性水平的检测结果 | 第82-83页 |
| ·遗传转化体系的建立 | 第83页 |
| ·小结 | 第83-85页 |
| 结论 | 第85-86页 |
| 展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 附录A 测序结果 | 第94-99页 |
| 附录B 论文中所用质粒图谱 | 第99-101页 |
| 附录C 所构建的质粒及部分质粒图解 | 第101-103页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
