| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-16页 |
| ·马传染性贫血病毒 | 第10页 |
| ·马传染性贫血病毒受体 | 第10-11页 |
| ·蛋白质表达和纯化的策略 | 第11-13页 |
| ·表达系统的选择 | 第11-12页 |
| ·分离纯化方法 | 第12-13页 |
| ·蛋白质晶体学研究 | 第13-16页 |
| 第二章 引言 | 第16-18页 |
| ·研究目的和意义 | 第16页 |
| ·研究的主要内容 | 第16页 |
| ·技术路线 | 第16-18页 |
| 第三章 重组ELR1-T蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第18-28页 |
| ·实验材料 | 第18-20页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第18-19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·生物信息学分析工具 | 第20页 |
| ·ELR1基因的序列分析 | 第20页 |
| ·重组ELR1-T原核表达载体的构建 | 第20-23页 |
| ·ELR1-T基因的PCR扩增 | 第20页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第20-21页 |
| ·载体和PCR产物的处理 | 第21页 |
| ·PCR产物的T4连接 | 第21-22页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌TOP10感受态细胞 | 第22页 |
| ·阳性克隆质粒的鉴定 | 第22页 |
| ·阳性克隆质粒的提取 | 第22-23页 |
| ·重组ELR1-T蛋白的原核表达 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆质粒转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞 | 第23页 |
| ·重组ELR1-T蛋白的表达 | 第23页 |
| ·菌体的收集和处理 | 第23-24页 |
| ·重组ELR1-T蛋白的纯化 | 第24-25页 |
| ·高亲和Ni-NTA Resin初步纯化 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE电泳的检测 | 第24-25页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 第四章 重组ELR1-T蛋白在昆虫细胞胞内的表达与纯化 | 第28-38页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第28-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·重组ELR1-T昆虫细胞胞内表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·ELR1-T基因的PCR扩增 | 第30页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第30-31页 |
| ·载体和PCR产物的双酶切与纯化 | 第31页 |
| ·PCR产物与pFastBac His-GST载体的连接 | 第31页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌TOP10感受态细胞 | 第31页 |
| ·阳性克隆质粒的提取和鉴定 | 第31-32页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第32页 |
| ·阳性重组Bacmid-ELR1-T质粒的提取与鉴定 | 第32-33页 |
| ·昆虫细胞的转染与病毒的扩增 | 第33页 |
| ·重组Bacmid-ELR1-T质粒转染昆虫细胞 | 第33页 |
| ·PO代病毒的收取和P1代病毒的扩增 | 第33页 |
| ·重组ELR1-T蛋白在昆虫细胞胞内的表达 | 第33-34页 |
| ·细胞的培养 | 第33-34页 |
| ·重组ELR1-T蛋白的表达 | 第34页 |
| ·细胞的收集和处理 | 第34页 |
| ·重组ELR1-T蛋白的纯化 | 第34-36页 |
| ·高亲和Ni-NTA Resin初步纯化 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE电泳的检测 | 第34-35页 |
| ·高亲和GST Resin纯化 | 第35页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| 第五章 重组ELR1-T蛋白在昆虫细胞中的分泌表达与纯化 | 第38-50页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第38-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39-40页 |
| ·重组ELR1-T昆虫分泌表达载体的构建 | 第40-44页 |
| ·ELR1-T基因的PCR扩增 | 第40页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第40页 |
| ·分泌载体的改造 | 第40-42页 |
| ·载体和PCR产物的双酶切与纯化 | 第42页 |
| ·PCR产物与pFastBacSP His载体的连接 | 第42-43页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌TOP10感受态细胞 | 第43页 |
| ·阳性克隆质粒的提取和鉴定 | 第43页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第43页 |
| ·阳性重组Bacmid-ELR1-T质粒的提取与鉴定 | 第43-44页 |
| ·昆虫细胞的转染与病毒的扩增 | 第44-45页 |
| ·重组Bacmid-ELR1-T质粒转染昆虫细胞 | 第44页 |
| ·P0代病毒的收取和P1代病毒的扩增 | 第44-45页 |
| ·重组ELR1-T蛋白在昆虫细胞中的分泌表达 | 第45页 |
| ·昆虫细胞的培养 | 第45页 |
| ·重组ELR1-T蛋白的分泌表达 | 第45页 |
| ·细胞上清的收集和处理 | 第45页 |
| ·重组ELR1-T蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| ·高亲和Ni-NTA Resin初步纯化 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE电泳的检测 | 第46页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第六章 重组ELR1-T蛋白的晶体生长研究 | 第50-52页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·结晶条件筛选 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 第七章 结论 | 第52-54页 |
| 第八章 全文讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 附录一 英文缩略表 | 第58-60页 |
| 附录二 载体图谱 | 第60-62页 |
| 附录三 序列比对 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 发表论文 | 第68页 |
