苏云金芽胞杆菌YBT-1520热胁迫下的生理变化及差异蛋白质组研究
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-40页 |
| ·蛋白质组学研究进展 | 第14-18页 |
| ·蛋白质组学的产生背景和相关概念 | 第14页 |
| ·蛋白质组学的发展现状 | 第14-15页 |
| ·蛋白质组学研究的方法和技术 | 第15-18页 |
| ·样品的制备 | 第15-16页 |
| ·分离和分析 | 第16页 |
| ·蛋白点的检测 | 第16-17页 |
| ·图像分析 | 第17页 |
| ·蛋白质鉴定技术 | 第17-18页 |
| ·生物信息学分析 | 第18页 |
| ·蛋白质组学在细菌胁迫反应中的应用 | 第18-22页 |
| ·单因素胁迫研究 | 第19-21页 |
| ·饥饿刺激子 | 第19页 |
| ·温度刺激子 | 第19-20页 |
| ·氧化刺激子 | 第20页 |
| ·pH刺激子 | 第20-21页 |
| ·渗透压刺激子 | 第21页 |
| ·其它刺激子 | 第21页 |
| ·多因素胁迫研究 | 第21-22页 |
| ·热胁迫反应机制 | 第22-30页 |
| ·选择性应激机制 | 第22-29页 |
| ·Ⅰ型热休克基因——HrcA调节子 | 第23-25页 |
| ·Ⅱ型热休克基因——SigmaB调节子 | 第25-27页 |
| ·Ⅲ型热休克基因——CtsR调节子 | 第27-29页 |
| ·Ⅳ型热休克基因——HtpG操纵子 | 第29页 |
| ·Ⅴ型热休克基因——CssRS调节子 | 第29页 |
| ·非选择性应激机制 | 第29-30页 |
| ·对核糖体的抑制 | 第29-30页 |
| ·对RNA聚合酶的抑制 | 第30页 |
| ·抑制的解除 | 第30页 |
| ·苏云金芽胞杆菌简介 | 第30-38页 |
| ·主要生理特性 | 第31-36页 |
| ·芽胞 | 第31-34页 |
| ·伴胞晶体 | 第34-35页 |
| ·其它杀虫活性物质 | 第35页 |
| ·聚β-羟基于酸(PHB) | 第35-36页 |
| ·伴胞品体形成的生理生化机制 | 第36-38页 |
| ·营养因素 | 第36-37页 |
| ·代谢模式 | 第37页 |
| ·环境因素 | 第37-38页 |
| ·菌株YBT-1520的主要特性 | 第38页 |
| ·本课题的立题背景及研究目的 | 第38-40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-55页 |
| ·实验材料 | 第40-45页 |
| ·菌株和培养基 | 第40页 |
| ·培养条件 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40-41页 |
| ·主要试剂的配制 | 第41-44页 |
| ·主要仪器 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-55页 |
| ·细菌形态观察 | 第45页 |
| ·菌数的测定 | 第45页 |
| ·芽胞产率的测定 | 第45-46页 |
| ·生长曲线的测定 | 第46页 |
| ·鞭毛染色实验 | 第46页 |
| ·运动性实验 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE蛋白样品的制备和检测 | 第47-48页 |
| ·蛋白样品的密度定量 | 第47页 |
| ·胞内总蛋白样品的制备 | 第47页 |
| ·杀虫晶体蛋白样品的制备 | 第47页 |
| ·蛋白样品的检测——SDS-PAGE | 第47-48页 |
| ·染色及脱色 | 第48页 |
| ·聚β-羟基丁酸(PHB)的检测 | 第48-49页 |
| ·苏云金芽胞杆菌RNA相关操作 | 第49-51页 |
| ·TRIzol法提RNA | 第49页 |
| ·RNA的定量及质量检测 | 第49页 |
| ·RNA样品中DNA的消化 | 第49页 |
| ·RT-PCR | 第49-51页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第51页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第51-52页 |
| ·双向电泳蛋白样品的制备及定量 | 第52-53页 |
| ·胞内蛋白的制备及定量 | 第52页 |
| ·胞外蛋白的制备及定量 | 第52-53页 |
| ·双向凝胶电泳(2-DE) | 第53页 |
| ·银染 | 第53-54页 |
| ·图像扫描及分析 | 第54页 |
| ·胶内酶切及MALDI-TOF/MS | 第54-55页 |
| 3 结果与讨论 | 第55-108页 |
| ·热胁迫下菌株YBT-1520的差异蛋白质组分析 | 第55-78页 |
| ·双向电泳胶图概述 | 第55-60页 |
| ·胞内差异蛋白的质谱鉴定结果 | 第60-64页 |
| ·差异蛋白的功能分类(COG) | 第64页 |
| ·不同时间点下差异蛋白的分布 | 第64-66页 |
| ·差异蛋白的表达量分析 | 第66-75页 |
| ·上调蛋白 | 第68-70页 |
| ·下调蛋白 | 第70-75页 |
| ·可恢复蛋白 | 第75页 |
| ·热胁迫后细胞的适应性耐受能力 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| ·热胁迫对菌株YBT-1520主要生理特性的影响 | 第78-108页 |
| ·基本特性的变化 | 第78-84页 |
| ·生长曲线 | 第78-79页 |
| ·细胞形态变化 | 第79-80页 |
| ·细胞表面层蛋白SLP的表达差异 | 第80-81页 |
| ·鞭毛的形态变化 | 第81-82页 |
| ·鞭毛蛋白FlaA和FlaB的表达差异 | 第82-83页 |
| ·运动能力的改变 | 第83-84页 |
| ·小结 | 第84页 |
| ·对芽胞和ICPs的影响 | 第84-93页 |
| ·不同温度下的芽胞产率 | 第84-85页 |
| ·芽胞形成相关Sigma因子的转录差异 | 第85-86页 |
| ·芽胞形成相关Sigma因子的表达差异 | 第86-87页 |
| ·杀虫晶体蛋白的表达差异 | 第87-88页 |
| ·"60 kDa蛋白"的胰酶消化反应 | 第88-90页 |
| ·基因cry1的检测 | 第90-91页 |
| ·基因cry1和cry2的转录差异 | 第91-92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| ·对潜在毒素蛋白和蛋白酶的影响 | 第93-97页 |
| ·潜在毒索蛋白的表达差异 | 第93-95页 |
| ·蛋白酶的表达差异 | 第95-96页 |
| ·小结 | 第96-97页 |
| ·对聚β-羟基丁酸(PHB)的影响 | 第97-104页 |
| ·PHB颗粒大小和形态的变化 | 第97页 |
| ·PHB颗粒表面蛋白PhaP的表达差异 | 第97-99页 |
| ·PHB含量的变化 | 第99-100页 |
| ·PHB合成代谢酶的表达差异 | 第100-102页 |
| ·PHB分解代谢酶的表达差异 | 第102-103页 |
| ·PHB持续积累的生理学意义 | 第103-104页 |
| ·小结 | 第104页 |
| ·热胁迫后主要生理特性的恢复 | 第104-108页 |
| ·恢复生长时的细胞形态 | 第104-106页 |
| ·不同热胁迫下ICPs的表达差异 | 第106-107页 |
| ·小结 | 第107-108页 |
| 4 总结与展望 | 第108-111页 |
| ·总结 | 第108-109页 |
| ·展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-126页 |
| 攻读博士期间发表和待发表的论文 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
