| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-19页 |
| 1.1 高温逆境对植物生长发育及生理的影响 | 第13页 |
| 1.2 热激蛋白概念、分类及作用 | 第13-15页 |
| 1.2.1 热激蛋白的概念 | 第13-14页 |
| 1.2.2 热激蛋白的分类与分布 | 第14-15页 |
| 1.2.3 HSP70作用及功能研究 | 第15页 |
| 1.3 热激蛋白相关基因克隆及调控机理 | 第15-16页 |
| 1.4 启动子概念、分类及功能 | 第16-17页 |
| 1.4.1 启动子的概念 | 第16页 |
| 1.4.2 启动子的分类 | 第16页 |
| 1.4.3 启动子的功能 | 第16-17页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第17-19页 |
| 第二章 三色堇VtHSP70基因家族高温响应的表达分析 | 第19-35页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂、菌株和质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 材料处理 | 第21页 |
| 2.2.2 三色堇总RNA提取方法 | 第21-22页 |
| 2.2.3 VtHSP70基因的选择 | 第22-23页 |
| 2.2.4 反转录体系构建 | 第23-24页 |
| 2.2.5 特异性引物设计及验证 | 第24-26页 |
| 2.2.6 实时荧光定量表达体系构建 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-33页 |
| 2.3.1 RNA提取与质量检测 | 第27-29页 |
| 2.3.2 引物的特异性 | 第29-30页 |
| 2.3.3 热胁迫下VtHSP70基因的表达差异 | 第30-33页 |
| 2.4 讨论与结论 | 第33-35页 |
| 第三章 三色堇VtHSP70-4、VtHSP70-8和VtHSP70-16基因全长克隆 | 第35-53页 |
| 3.1 材料 | 第35页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 3.2 方法 | 第35-42页 |
| 3.2.1 材料处理 | 第35页 |
| 3.2.2 1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性 | 第35页 |
| 3.2.3 5'-RACE和3'-RACE cDNA合成 | 第35-37页 |
| 3.2.4 VtHSP70基因引物设计 | 第37页 |
| 3.2.5 VtHSP70-4、VtHSP70-8和VtHSP70-16基因的5'端克隆 | 第37-38页 |
| 3.2.6 VtHSP70-4、VtHSP70-8和VtHSP70-16基因的3'端克隆 | 第38页 |
| 3.2.7 VtHSP70-4和VtHSP70-8基因的cDNA全长克隆 | 第38-39页 |
| 3.2.8 1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物 | 第39页 |
| 3.2.9 PCR扩增产物胶回收、连接及转化 | 第39-40页 |
| 3.2.10 菌液PCR | 第40-41页 |
| 3.2.11 重组质粒提取 | 第41页 |
| 3.2.12 生物信息学分析 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-52页 |
| 3.3.1 RNA浓度与质量检测 | 第42页 |
| 3.3.2 08H材料中VtHSP70-4基因5'端和3'端序列扩增 | 第42-43页 |
| 3.3.3 DFM-16和08H材料中VtHSP70-8 基因5'端和3'端序列扩增 | 第43-44页 |
| 3.3.4 VtHSP70-4和VtHSP70-8基因cDNA全长序列扩增 | 第44-47页 |
| 3.3.5 VtHSP70-4、VtHSP70-8和VtHSP70-16基因序列同源比对 | 第47-48页 |
| 3.3.6 亲疏水性分析 | 第48-49页 |
| 3.3.7 磷酸化位点预测 | 第49-50页 |
| 3.3.8 跨膜结构预测 | 第50-51页 |
| 3.3.9 信号肽预测 | 第51-52页 |
| 3.4 讨论与结论 | 第52-53页 |
| 第四章 VtHSP70-16基因cDNA/gDNA克隆与结构分析 | 第53-61页 |
| 4.1 材料 | 第53页 |
| 4.1.1 主要试剂、菌株和质粒 | 第53页 |
| 4.2 方法 | 第53-55页 |
| 4.2.1 材料处理 | 第53页 |
| 4.2.2 三色堇总RNA提取 | 第53页 |
| 4.2.3 反转录体系构建 | 第53页 |
| 4.2.4 三色堇DNA提取 | 第53页 |
| 4.2.5 RNA和DNA的质量检测 | 第53-54页 |
| 4.2.6 VtHSP70-16 cDNA序列及gDNA序列扩增 | 第54-55页 |
| 4.2.7 PCR扩增产物的回收、连接及转化 | 第55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-60页 |
| 4.3.1 RNA浓度与质量检测 | 第55页 |
| 4.3.2 两种提取方法获得DNA的质量和效率比较 | 第55页 |
| 4.3.3 琼脂糖凝胶电泳检测两种方法提取DNA的质量和浓度 | 第55-56页 |
| 4.3.4 VtHSP70-16 cDNA及gDNA序列扩增 | 第56-58页 |
| 4.3.5 VtHSP70-16基因同源比对及系统进化分析 | 第58-60页 |
| 4.4 讨论与分析 | 第60-61页 |
| 第五章 VtHSP70-16基因启动子克隆与载体构建 | 第61-73页 |
| 5.1 材料 | 第61页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第61页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第61页 |
| 5.2 方法 | 第61-66页 |
| 5.2.1 材料处理 | 第61页 |
| 5.2.2 基因组DNA提取 | 第61页 |
| 5.2.3 DNA电泳和浓度测定 | 第61页 |
| 5.2.4 胶回收及连接转化 | 第61页 |
| 5.2.5 VtHSP70-16基因启动子序列扩增 | 第61-64页 |
| 5.2.6 VtHSP70-16基因启动子载体构建 | 第64-66页 |
| 5.3 结果与分析 | 第66-70页 |
| 5.3.1 三色堇VtHSP70-16基因启动子克隆 | 第66-67页 |
| 5.3.2 VtHSP70-16基因启动子序列比对 | 第67页 |
| 5.3.3 VtHSP70-16基因启动子区调控元件分析 | 第67-69页 |
| 5.3.4 PJIBIA163-1300表达载体构建 | 第69页 |
| 5.3.5 启动子质粒酶切 | 第69-70页 |
| 5.3.6 PJIBIA163-1300表达载体与启动子片段连接 | 第70页 |
| 5.4 讨论与结论 | 第70-73页 |
| 全文结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第85-87页 |
| 附录A | 第87-88页 |
| 附录B | 第88-89页 |
| 附录C | 第89-90页 |
| 附录D | 第90-91页 |
| 附录E | 第91-92页 |
| 附录F | 第92页 |
