| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 橡胶生物合成 | 第10-14页 |
| 1.1.1 橡胶粒子 | 第10-11页 |
| 1.1.2 橡胶生物合成途径研究进展 | 第11-14页 |
| 1.2 蛋白质亚细胞定位 | 第14-16页 |
| 1.3 酵母双杂交技术 | 第16-17页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 1.5 技术路线 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-38页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 质粒与菌种 | 第19页 |
| 2.1.3 酵母培养所用培养基 | 第19页 |
| 2.1.4 生化试剂 | 第19-20页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第20-38页 |
| 2.2.1 橡胶树胶乳总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 橡胶树胶乳cDNA合成和HbREF3基因的克隆 | 第21-25页 |
| 2.2.3 HbREF3基因生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.2.4 HbREF3基因组织的的表达分析 | 第25-26页 |
| 2.2.5 HbREF3的原核表达 | 第26-29页 |
| 2.2.6 抗体制备及Western blotting检测 | 第29-30页 |
| 2.2.7 HbREF3,AtREF, NtREF亚细胞定位 | 第30-33页 |
| 2.2.8 酵母双杂交筛选HbREF3的候选互作蛋白 | 第33-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-59页 |
| 3.1 橡胶树胶乳总RNA提取与基因克隆 | 第38-39页 |
| 3.1.1 胶乳总RNA的提取 | 第38页 |
| 3.1.2 HbREF3基因的克隆 | 第38-39页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第39-44页 |
| 3.3 HbREF3基因的表达特性分析 | 第44-46页 |
| 3.4 HbREF3的原核表达 | 第46-47页 |
| 3.4.1 HbREF3基因原核表达载体的构建 | 第46页 |
| 3.4.2 HbREF3的诱导表达及SDS-PAGE电泳分析 | 第46-47页 |
| 3.5 Western Blotting检测 | 第47-48页 |
| 3.6 HbREF3、AtREF与NtREF蛋白的亚细胞定位 | 第48-51页 |
| 3.6.1 提取拟南芥和烟草叶片总RNA | 第48-49页 |
| 3.6.2 HbREF3、AtREF与NtREF表达载体构建 | 第49-50页 |
| 3.6.3 HbREF3、AtREF与NtREF蛋白的亚细胞定位 | 第50-51页 |
| 3.7 酵母双杂交筛选HbREF3候选互作蛋白 | 第51-59页 |
| 3.7.1 HbREF3诱饵表达载体构建 | 第51-54页 |
| 3.7.2 诱饵载体的毒性检测 | 第54页 |
| 3.7.3 诱饵载体的自激活性检测 | 第54-55页 |
| 3.7.4 杂交文库镜检及杂交效率计算 | 第55-56页 |
| 3.7.5 酵母双杂交筛选HbREF3候选互作蛋白 | 第56页 |
| 3.7.6 共转化实验验证HbREF3候选互作蛋白 | 第56-59页 |
| 4 讨论 | 第59-63页 |
| 4.1 HbREF3是REF亚家族的新成员 | 第59页 |
| 4.2 HbREF3的表达特性与亚细胞定位 | 第59-60页 |
| 4.3 HbREF3的候选互作蛋白及其功能 | 第60-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
