| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-23页 |
| 1.1 溶瘤痘苗病毒的概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 溶瘤痘苗病毒的结构及特点 | 第16页 |
| 1.1.2 溶瘤痘苗病毒的溶瘤机制 | 第16页 |
| 1.1.3 溶瘤痘苗病毒的应用进展 | 第16-17页 |
| 1.2 FAP的概述 | 第17-18页 |
| 1.2.1 FAP的发现 | 第17页 |
| 1.2.2 FAP的结构 | 第17-18页 |
| 1.2.3 FAP与肿瘤微环境 | 第18页 |
| 1.3 BiTE的概述 | 第18-20页 |
| 1.3.1 BiTE的结构 | 第18-19页 |
| 1.3.2 BiTE作用机制 | 第19-20页 |
| 1.3.3 BiTE的临床应用 | 第20页 |
| 1.3.4 BiTE的面临的挑战 | 第20页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 1.5 本研究的内容及技术路线 | 第21-23页 |
| 1.5.1 本研究的内容 | 第21-22页 |
| 1.5.2 本研究的技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 重组溶瘤痘苗病毒rVVDD-BiTE.FAP的构建 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 质粒、病毒、菌株和细胞株 | 第23-24页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第24-25页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.5 引物序列设计 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 质粒pSEL2N1-BiTE.FAP的构建 | 第27-34页 |
| 2.2.2 贴壁细胞的培养 | 第34-36页 |
| 2.2.3 痘苗病毒与重组质粒同源重组 | 第36页 |
| 2.2.4 重组病毒的空斑筛选及纯化 | 第36-37页 |
| 2.3 实验结果 | 第37-40页 |
| 2.3.1 重组病毒构建示意图 | 第37-38页 |
| 2.3.2 PCR扩增目的片段 | 第38页 |
| 2.3.3 重组质粒pSEL2N1-BITE-FAP的PCR鉴定结果 | 第38-39页 |
| 2.3.4 重组病毒纯度的镜下鉴定结果 | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 重组溶瘤痘苗病毒rVVDD-BiTE.FAP的验证 | 第41-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-43页 |
| 3.1.1 质粒和细胞株 | 第41页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第42-43页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第43页 |
| 3.1.5 引物序列设计 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-49页 |
| 3.2.1 重组病毒的滴度测定 | 第43-44页 |
| 3.2.2 重组溶瘤痘病毒基因组PCR验证 | 第44-46页 |
| 3.2.3 Westernblot检测BITE.FAP蛋白的表达 | 第46-47页 |
| 3.2.4 重组病毒的体外复制能力检测 | 第47-48页 |
| 3.2.5 重组病毒的体外溶瘤能力测定 | 第48-49页 |
| 3.3 实验结果 | 第49-53页 |
| 3.3.1 重组病毒的滴度测定结果 | 第49-50页 |
| 3.3.2 重组病毒基因组PCR验证 | 第50页 |
| 3.3.3 Westernblot检测BITE.FAP蛋白表达 | 第50-51页 |
| 3.3.4 重组病毒的体外复制能力 | 第51-52页 |
| 3.3.5 重组病毒的溶瘤能力 | 第52-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 重组病毒对过表达FAP的小鼠肺癌细胞杀伤作用 | 第55-68页 |
| 4.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第55页 |
| 4.1.2 病毒和细胞株 | 第55页 |
| 4.1.3 主要实验试剂 | 第55-56页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第56页 |
| 4.1.5 主要实验仪器及耗材 | 第56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-61页 |
| 4.2.1 小鼠脾脏T细胞的准备 | 第56-57页 |
| 4.2.2 MTS法检测重组病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株的杀伤效果 | 第57-59页 |
| 4.2.3 LDH法检测重组病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株的杀伤效果 | 第59页 |
| 4.2.4 流式细胞术检测杀伤效果 | 第59-60页 |
| 4.2.5 ELISA检测共培养体系中IL-2和IFN-γ的表达 | 第60-61页 |
| 4.3 统计学处理 | 第61页 |
| 4.4 实验结果 | 第61-66页 |
| 4.4.1 小鼠脾脏T细胞的活化 | 第61-62页 |
| 4.4.2 荧光显微镜下观察重组病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株的杀伤作用 | 第62-63页 |
| 4.4.3 MTS法检测重组病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株的抑瘤作用 | 第63-64页 |
| 4.4.4 LDH法检测重组病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株的毒性作用 | 第64页 |
| 4.4.5 流式细胞术检测杀伤效果 | 第64-65页 |
| 4.4.6 共培养体系中IL-2和IFN-γ的表达 | 第65-66页 |
| 4.5 讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 结论和展望 | 第68-70页 |
| 5.1 结论 | 第68-69页 |
| 5.2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第76页 |
