| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 间质干细胞与肿瘤 | 第15-19页 |
| 1.1.1 间质干细胞 | 第15-16页 |
| 1.1.2 间质干细胞参与肿瘤微环境形成 | 第16-17页 |
| 1.1.3 间质干细胞与肿瘤转移 | 第17-19页 |
| 1.1.3.1 MSC促进肿瘤EMT | 第18页 |
| 1.1.3.2 MSC促进肿瘤干性增强 | 第18-19页 |
| 1.2 microRNA与肿瘤转移 | 第19-24页 |
| 1.2.1 microRNA | 第19-20页 |
| 1.2.2 肿瘤细胞来源miRNA与肿瘤转移 | 第20-22页 |
| 1.2.3 miRNA介导肿瘤微环境促肿瘤转移作用 | 第22-24页 |
| 1.2.3.1 肿瘤微环境来源miRNA直接调控肿瘤转移 | 第22-23页 |
| 1.2.3.2 肿瘤微环境通过影响肿瘤细胞miRNA促肿瘤转移 | 第23-24页 |
| 1.3 研究目的、方法、技术路线及意义 | 第24-27页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第24页 |
| 1.3.2 研究方法 | 第24页 |
| 1.3.3 技术路线 | 第24-26页 |
| 1.3.4 预期结果及研究意义 | 第26-27页 |
| 第二章 GC-MSCS促进胃癌转移及上调胃癌细胞MIR-4669表达 | 第27-41页 |
| 2.1 材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 临床胃癌组织 | 第27页 |
| 2.1.2 胃癌细胞株 | 第27页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第27页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.5 实验设备 | 第28-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-35页 |
| 2.2.1 GC-MSC分离培养 | 第29-30页 |
| 2.2.2 GC-MSC细胞上清的制备 | 第30页 |
| 2.2.3 GC-MSC培养上清处理胃癌细胞 | 第30页 |
| 2.2.4 Transwell迁移实验 | 第30页 |
| 2.2.5 蛋白提取 | 第30-31页 |
| 2.2.6 Westernblot | 第31页 |
| 2.2.7 总RNA提取 | 第31页 |
| 2.2.8 mRNA逆转录 | 第31-32页 |
| 2.2.9 mRNA实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第32页 |
| 2.2.10 miRNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.11 miRNA逆转录 | 第33页 |
| 2.2.12 miRNA实时荧光定量PCR检测 | 第33-34页 |
| 2.2.13 动物实验 | 第34页 |
| 2.2.14 免疫组化 | 第34-35页 |
| 2.2.15 数据分析统计 | 第35页 |
| 2.3 结果 | 第35-39页 |
| 2.3.1 GC-MSC体外促进胃癌细胞迁移 | 第35-36页 |
| 2.3.2 GC-MSC促进胃癌细胞EMT | 第36页 |
| 2.3.3 GC-MSC显著诱导胃癌细胞表达干细胞转录因子Sall | 第36-37页 |
| 2.3.4 GC-MSC显著促进胃癌细胞体内转移 | 第37页 |
| 2.3.5 GC-MSC处理组胃癌组织Sall4表达增强 | 第37-38页 |
| 2.3.6 GC-MSC体内外显著促进胃癌细胞表达miR- | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 miR-4669介导GC-MSC促胃癌转移 | 第41-50页 |
| 3.1 材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第41页 |
| 3.1.2 实验设备 | 第41页 |
| 3.1.3 细胞株 | 第41页 |
| 3.1.4 实验动物 | 第41-42页 |
| 3.2 方法 | 第42-43页 |
| 3.2.1 细胞转染 | 第42页 |
| 3.2.2 miRNA提取 | 第42页 |
| 3.2.3 miRNA逆转录 | 第42页 |
| 3.2.4 miRNA实时荧光定量检测 | 第42页 |
| 3.2.5 Transwell迁移实验 | 第42页 |
| 3.2.6 蛋白提取 | 第42-43页 |
| 3.2.7 Westernblot | 第43页 |
| 3.3 结果 | 第43-47页 |
| 3.3.1 胃癌细胞中miR-4669过表达可重现GC-MSC促胃癌转移作用 | 第43-46页 |
| 3.3.2 干预miR-4669的表达可阻断GC-MSC促胃癌转移作用 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-50页 |
| 第四章 miR-4669通过靶向抑制TIMP3促进胃癌转移 | 第50-63页 |
| 4.1 材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第50页 |
| 4.1.2 实验设备 | 第50-51页 |
| 4.2 方法 | 第51-56页 |
| 4.2.1 双荧光素酶报告基因载体的构建 | 第51-54页 |
| 4.2.1.1 TIMP3mRNA3’UTR片段合成与纯化 | 第51-52页 |
| 4.2.1.2 质粒小提 | 第52页 |
| 4.2.1.3 载体酶切 | 第52页 |
| 4.2.1.4 载体胶回收 | 第52-53页 |
| 4.2.1.5 载体连接 | 第53页 |
| 4.2.1.6 感受态细胞制备 | 第53页 |
| 4.2.1.7 转化及菌种保存 | 第53-54页 |
| 4.2.1.8 载体连接产物酶切验证 | 第54页 |
| 4.2.1.9 去内毒素质粒小提 | 第54页 |
| 4.2.2 细胞转染 | 第54-55页 |
| 4.2.3 荧光素酶活性检测 | 第55页 |
| 4.2.4 si-TIMP3转染细胞 | 第55页 |
| 4.2.5 TIMP3过表达质粒转染细胞 | 第55-56页 |
| 4.2.6 总RNA提取 | 第56页 |
| 4.2.7 蛋白提取 | 第56页 |
| 4.2.8 Westernblot | 第56页 |
| 4.2.9 实时荧光定量PCR | 第56页 |
| 4.2.10 Transwell迁移实验 | 第56页 |
| 4.2.11 mRNA逆转录 | 第56页 |
| 4.3 结果 | 第56-60页 |
| 4.3.1 靶基因预测及检测验证 | 第56-57页 |
| 4.3.2 TIMP3过表达抑制miR-4669促胃癌转移作用 | 第57-58页 |
| 4.3.3 TIMP3敲减可显著促胃癌转移 | 第58-59页 |
| 4.3.4 TIMP3过表达可阻断GC-MSC发挥促胃癌转移作用 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-63页 |
| 第五章 结论与展望 | 第63-64页 |
| 5.1 结论 | 第63页 |
| 5.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及参加会议 | 第76页 |
