| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 纤维素和纤维素酶 | 第11-13页 |
| 1.1.1 纤维素 | 第11-12页 |
| 1.1.2 纤维素复合酶 | 第12-13页 |
| 1.2 基因表达系统研究概况 | 第13-14页 |
| 1.3 国内外研究现状 | 第14-15页 |
| 1.4 纤维素酶的应用 | 第15-16页 |
| 1.4.1 纤维素酶在农业上的应用 | 第15页 |
| 1.4.2 纤维素酶在造纸业上的应用 | 第15页 |
| 1.4.3 纤维素酶在纺织业上的应用 | 第15页 |
| 1.4.4 纤维素酶在洗涤剂行业上的应用 | 第15页 |
| 1.4.5 纤维素酶在饲料业上的应用 | 第15-16页 |
| 1.4.6 纤维素酶在食品业上的应用 | 第16页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第16-17页 |
| 1.6 本研究的技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 试剂及酶类 | 第18页 |
| 2.1.3 试剂及配方 | 第18-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-31页 |
| 2.2.1 egVII基因的克隆 | 第20-23页 |
| 2.2.2 基因生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.2.3 酶切与连接 | 第23-24页 |
| 2.2.4 P.pastoris转化 | 第24-25页 |
| 2.2.5 重组P.pastoris的诱导表达 | 第25-26页 |
| 2.2.6 重组酶的酶学特性及动力学参数测定 | 第26-28页 |
| 2.2.7 重组转化子发酵条件的优化 | 第28-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-53页 |
| 3.1 内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第31-33页 |
| 3.1.1 T.viride核酸的提取 | 第31页 |
| 3.1.2 egVII基因的克隆 | 第31-33页 |
| 3.2 基因序列分析 | 第33-38页 |
| 3.2.1 egVII基因DNA序列与cDNA序列分析与比对 | 第33-35页 |
| 3.2.2 EGVII的蛋白质结构分析 | 第35-38页 |
| 3.3 EGVII基因的P.pastoris转化及表达 | 第38-41页 |
| 3.3.1 重组表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.2 egVII基因在P.pastoris中的转化 | 第39页 |
| 3.3.3 P.pastoris转化子His+Muts型鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.4 P.pastoris转化子的鉴定 | 第40页 |
| 3.3.5 G418筛选不同拷贝数的转化子 | 第40-41页 |
| 3.4 重组酶的诱导表达及分析 | 第41-42页 |
| 3.5 重组酶的相关性质分析 | 第42-50页 |
| 3.5.1 葡萄糖标准曲线 | 第42页 |
| 3.5.2 重组蛋白的SDS-PAGE和水解圈分析 | 第42-43页 |
| 3.5.3 重组酶的酶学特性分析 | 第43-46页 |
| 3.5.4 酶促动力学分析 | 第46-50页 |
| 3.6 重组酶的发酵条件优化 | 第50-53页 |
| 3.6.1 甲醇含量对酶活性影响的分析 | 第50页 |
| 3.6.2 YNB含量对酶活性影响的分析 | 第50-51页 |
| 3.6.3 pH对酶活性影响的分析 | 第51页 |
| 3.6.4 温度对酶活性影响的分析 | 第51-52页 |
| 3.6.5 重组P.pastoris发酵条件的正交实验 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 4.1 内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第53页 |
| 4.1.1 基因供体的选择 | 第53页 |
| 4.1.2 EGVII的结构分析 | 第53页 |
| 4.2 内切葡聚糖酶基因的表达 | 第53-56页 |
| 4.2.1 基因表达系统的选择 | 第53-54页 |
| 4.2.2 制约外源基因表达的因素 | 第54页 |
| 4.2.3 高效表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.4 内切葡聚糖酶诱导表达的研究 | 第55页 |
| 4.2.5 内切葡聚糖酶酶学特性分析 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64页 |
