| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第7-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-26页 |
| 1.1. MEK/ERK通路与痛觉信号转导 | 第14-18页 |
| 1.1.1 MEK/ERK信号通路的组成 | 第14-17页 |
| 1.1.2 MEK/ERK信号通路在痛觉调制中的作用 | 第17-18页 |
| 1.1.3 ERK调节突触传递的可能机制 | 第18页 |
| 1.2. 磷酸化对MEK/ERK信号通路的影响 | 第18-21页 |
| 1.2.1 蛋白的磷酸化和去磷酸化是重要的细胞活动调控机制 | 第18-19页 |
| 1.2.2 激酶和磷酸酶对MEK/ERK通路的调节 | 第19-21页 |
| 1.2.3 PP1调节MEK/ERK信号通路的作用 | 第21页 |
| 1.3. 支架蛋白在调控MEK/ERK信号通路中的作用 | 第21-24页 |
| 1.3.1 支架蛋白调节MEK/ERK信号通路的作用机制 | 第21-23页 |
| 1.3.2 支架蛋白Spinophilin的结构和功能 | 第23-24页 |
| 1.4. 本研究的理论假说 | 第24-26页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第26-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-33页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第26页 |
| 2.1.2 实验器材 | 第26-27页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.5 实验溶液配制 | 第30-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-40页 |
| 2.2.1 炎性疼痛模型制备 | 第33页 |
| 2.2.2 鞘内注射 | 第33页 |
| 2.2.3 痛觉行为学测试 | 第33-34页 |
| 2.2.4 亚细胞组分的分离 | 第34-35页 |
| 2.2.5 蛋白免疫共沉淀（Co-IP） | 第35页 |
| 2.2.6 蛋白免疫印迹（Western Blot，WB） | 第35-36页 |
| 2.2.7 免疫组化 | 第36页 |
| 2.2.8 细胞转染 | 第36页 |
| 2.2.9 GST融合蛋白的表达与纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.10 His融合蛋白的表达与纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.11 GST pull-down试验 | 第38页 |
| 2.2.12 体外去磷酸化试验 | 第38页 |
| 2.2.13 电生理记录 | 第38-39页 |
| 2.2.14 数据统计与分析 | 第39-40页 |
| 第三章 实验结果 | 第40-83页 |
| 3.1 SPN与MEK、ERK的相互作用 | 第40-43页 |
| 3.1.1 SPN/PP1复合物与MEK、ERK的相互作用 | 第40-41页 |
| 3.1.2 MEK1与SPN、PP1之间的相互作用 | 第41页 |
| 3.1.3 ERK1/2 与SPN、PP1之间的相互作用 | 第41-42页 |
| 3.1.4 Raf-1 与SPN、PP1之间的相互作用 | 第42-43页 |
| 3.2 SPN与MEK、ERK发生相互作用的结构域 | 第43-47页 |
| 3.2.1 SPN与MEK1相结合的结构域 | 第44-46页 |
| 3.2.2 SPN与ERK1/2 相结合的结合域 | 第46-47页 |
| 3.3 SPN/PP1复合物对MEK、ERK磷酸化水平的影响 | 第47-54页 |
| 3.3.1 SPN对MEK和ERK磷酸化水平的影响 | 第47-49页 |
| 3.3.2 SPN对ERK1/2 磷酸化的直接调控作用 | 第49-50页 |
| 3.3.3 PP1在SPN调节MEK1磷酸化中的作用 | 第50-51页 |
| 3.3.4 PP1在SPN调节ERK2磷酸化中的作用 | 第51-52页 |
| 3.3.5 PP1对MEK1、ERK2与SPN结合的影响 | 第52-54页 |
| 3.4 SPN(F451A)对大鼠脊髓背角MEK、ERK磷酸化水平的影响 | 第54-60页 |
| 3.4.1 重组腺病毒表达载体对大鼠脊髓背角神经元的感染效率 | 第54-55页 |
| 3.4.2 SPN(F451A)对MEK1/2 磷酸化水平的影响 | 第55-56页 |
| 3.4.3 SPN(F451A)对ERK磷酸化水平的影响 | 第56页 |
| 3.4.4 SPN(F451A)对Raf-1 磷酸化水平的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.5 SPN(F451A)对pERK脊髓背角分布的影响 | 第57-58页 |
| 3.4.6 自发性神经活动在SPN(F451A)激活突触MEK/ERK中的作用 | 第58-60页 |
| 3.5 SPN/PP1调控NMDA受体的突触传递 | 第60-65页 |
| 3.5.1 SPN(F451A)对AMPAR/NMDAR的比值的影响 | 第60-61页 |
| 3.5.2 SPN(F451A)对AMPA受体mEPSCs的影响 | 第61-62页 |
| 3.5.3 SPN(F451A)对NMDA受体介导的突触反应的影响 | 第62-64页 |
| 3.5.4 SPN(F451A)对突触前递质释放的影响 | 第64-65页 |
| 3.6 SPN(F451A)对突触NMDA受体亚基的影响 | 第65-67页 |
| 3.6.1 SPN(F451A)对NMDA受体各亚基突触表达的影响 | 第65-66页 |
| 3.6.2 SPN(F451A)对突触传递的调节作用与GluN2B受体的关系 | 第66-67页 |
| 3.7 ERK/MLCK通路在SPN/PP1复合物调节突触传递中的作用 | 第67-71页 |
| 3.7.1 MEK/ERK在SPN(F451A)调节NMDA受体突触传递中的作用 | 第67-69页 |
| 3.7.2 SPN(F451A)活化的MEK/ERK对MLCK的磷酸化作用 | 第69-70页 |
| 3.7.3 MLCK在SPN(F451A)调节NMDA受体突触传递中的作用 | 第70-71页 |
| 3.8 SPN/PP1调控慢性炎性疼痛的信号机制 | 第71-76页 |
| 3.8.1 外周组织损伤对SPN和PP1蛋白表达的影响 | 第71页 |
| 3.8.2 外周组织损伤对SPN与PP1结合的影响 | 第71-73页 |
| 3.8.3 SPN(WT)对炎性疼痛大鼠脊髓MEK、ERK活性的逆转 | 第73-74页 |
| 3.8.4 SPN(WT)对炎性疼痛大鼠脊髓NMDA受体突触传递的影响 | 第74-75页 |
| 3.8.5 MEK/ERK在外周组织损伤诱发NMDA受体功能亢进中的作用 | 第75-76页 |
| 3.9 SPN定位的PP1在脊髓痛觉调制中的作用 | 第76-83页 |
| 3.9.1 SPN(F451A)能够诱发持续性痛觉超敏 | 第76-77页 |
| 3.9.2 SPN(F451A)能够引发持续性痛觉过敏 | 第77-78页 |
| 3.9.3 MEK/ERK通路在SPN(F451A)诱发脊髓痛觉敏化中的作用 | 第78-79页 |
| 3.9.4 NMDA受体在SPN(F451A)诱发脊髓痛觉敏化中的作用 | 第79-80页 |
| 3.9.5 SPN(WT)对炎性痛觉超敏的抑制作用 | 第80-81页 |
| 3.9.6 SPN(WT) 对炎性痛觉过敏的抑制作用 | 第81-83页 |
| 第四章 讨论 | 第83-87页 |
| 4.1 SPN与MEK/ERK相互作用的分子机制 | 第83页 |
| 4.2 SPN的支架作用与PP1去磷酸化MEK、ERK的关系 | 第83-84页 |
| 4.3 SPN/PP1对MEK/ERK活性的固有性抑制 | 第84页 |
| 4.4 ERK/MLCK通路在SPN/PP1调节GluN2B受体突触传递中的作用 | 第84-85页 |
| 4.5 脊髓背角SPN/PP1复合物的痛觉调控作用 | 第85-87页 |
| 第五章 结论及研究展望 | 第87-89页 |
| 5.1 结论 | 第87-88页 |
| 5.2 研究展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-98页 |
| 在学期间的研究成果 | 第98-100页 |
| 一、发表论文 | 第98-99页 |
| 二、参与课题 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
