| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第1章 文献综述 | 第7-19页 |
| 1.1 化石能源的利用和生物乙醇的生产 | 第7-8页 |
| 1.1.1 化石能源的利用 | 第7页 |
| 1.1.2 生物乙醇的生产 | 第7-8页 |
| 1.2 木质纤维素原料的利用 | 第8-12页 |
| 1.2.1 木质纤维素利用的意义 | 第8-9页 |
| 1.2.2 木质纤维素的组成 | 第9页 |
| 1.2.3 影响木质纤维素降解的因素 | 第9-10页 |
| 1.2.4 木质纤维素预处理 | 第10-11页 |
| 1.2.5 副产物的毒性和抑制机理 | 第11-12页 |
| 1.3 运动发酵单胞菌 | 第12-16页 |
| 1.3.1 运动发酵单胞菌的特性 | 第12-13页 |
| 1.3.2 运动发酵单胞菌对木质纤维素水解液副产物抑制物的耐受性 | 第13-14页 |
| 1.3.3 耐受糠醛的运动发酵单胞菌研究 | 第14-15页 |
| 1.3.4 糠醛耐受性机理的研究 | 第15-16页 |
| 1.4 基因组改组技术(Genome Shuffling) | 第16-17页 |
| 1.5 课题的提出及意义 | 第17-19页 |
| 第2章 材料和方法 | 第19-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-24页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第19-20页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第22-24页 |
| 2.1.5 培养基的配制 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 运动发酵单胞菌的培养 | 第24页 |
| 2.2.2 大肠杆菌的培养 | 第24-25页 |
| 2.2.3 运动发酵单胞菌基因组DNA的提取 | 第25页 |
| 2.2.4 易错PCR | 第25-26页 |
| 2.2.5 感受态细胞的制备和电转化 | 第26-27页 |
| 2.2.6 转化子的糠醛耐受性评价 | 第27页 |
| 2.2.7 HPLC测量发酵培养基中的成分 | 第27-28页 |
| 2.2.8 突变体稳定性实验 | 第28-29页 |
| 2.2.9 不同糠醛浓度下出发菌株和野生型菌株的生长和发酵差异 | 第29页 |
| 2.2.10 高糖浓度实验 | 第29页 |
| 2.2.11 全基因组重测序 | 第29页 |
| 2.2.12 酶活的测定 | 第29-31页 |
| 2.2.13 突变体F211 突变基因功能的鉴定 | 第31-33页 |
| 2.2.14 重组质粒T-Cm-1431LR和 T-Cm-0525LR转化运动发酵单胞菌 | 第33页 |
| 2.2.15 缺失突变体CP4-△1431和CP4-△0525 糠醛高糖的生长评价 | 第33-35页 |
| 第3章 结果和讨论 | 第35-61页 |
| 3.1 易错PCR全基因组改组选育耐糠醛的Z.mobilis菌株 | 第35-40页 |
| 3.1.1 第一轮改组 | 第35-37页 |
| 3.1.2 以F2-1 为出发菌株的第二轮全基因组改组 | 第37-38页 |
| 3.1.3 耐糠醛转化子的生长和发酵评价 | 第38-40页 |
| 3.2 糠醛耐受突变体的稳定性实验 | 第40-41页 |
| 3.3 不同糠醛浓度下突变体和野生型菌株的生长和发酵 | 第41-42页 |
| 3.4 不同葡萄糖浓度下菌株和生长和发酵 | 第42-47页 |
| 3.5 糠醛还原酶的活性测定 | 第47-48页 |
| 3.6 糠醛耐受突变体F211和F27 的全基因组重测序 | 第48-50页 |
| 3.7 构建ZCP4_1431和ZCP4_0525 基因缺失的突变体 | 第50-57页 |
| 3.7.1 pT-Cm质粒的构建 | 第52-53页 |
| 3.7.2 pT-Cm-1431L和 pT-Cm-0525L质粒的构建 | 第53-54页 |
| 3.7.3 pT-Cm-1431LR和 pT-Cm-0525LR质粒的构建 | 第54-56页 |
| 3.7.4 基因ZCP4_1431和ZCP4_0525 缺失突变体的获得 | 第56-57页 |
| 3.8 缺失突变体的评价 | 第57-61页 |
| 第4章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 4.1 结论 | 第61页 |
| 4.2 创新点 | 第61-62页 |
| 4.3 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 发表论文与参与科研项目说明 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
