| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 L-苏氨酸的简介 | 第10-11页 |
| 1.1.1 L-苏氨酸的结构与性质 | 第10页 |
| 1.1.2 L-苏氨酸的应用 | 第10-11页 |
| 1.2 L-苏氨酸的生产方法 | 第11-12页 |
| 1.2.1 天然提取法 | 第11页 |
| 1.2.2 化学合成法 | 第11-12页 |
| 1.2.3 微生物发酵法 | 第12页 |
| 1.3 大肠杆菌发酵生成L-苏氨酸的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.3.1 苏氨酸的生物合成途径 | 第12-14页 |
| 1.3.2 L-苏氨酸的代谢改造策略 | 第14-16页 |
| 1.4 辅因子工程 | 第16-20页 |
| 1.5 课题背景、意义及研究内容 | 第20-22页 |
| 第2章 加强中心碳代谢强化苏氨酸合成 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-28页 |
| 2.1.1 实验所用菌株与质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要仪器与试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.3 培养基配制方法 | 第26-27页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.1.5 本章所用引物 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.2.1 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因的获取 | 第28页 |
| 2.2.2 乳酸乳球菌基因组的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.3 引物的验证 | 第29页 |
| 2.2.4 目的基因的扩增与回收 | 第29-30页 |
| 2.2.5 目标质粒的提取与酶切回收 | 第30-31页 |
| 2.2.6 感受态大肠杆菌的制备与转化 | 第31-32页 |
| 2.2.7 转化细胞的筛选 | 第32页 |
| 2.2.8 大肠杆菌THRD电转化感受态的制备与转化 | 第32-33页 |
| 2.2.9 大肠杆菌的发酵实验 | 第33页 |
| 2.2.10 高效液相色谱法测定发酵液中的苏氨酸含量 | 第33-35页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第35-39页 |
| 2.3.1 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的异源表达 | 第35-36页 |
| 2.3.2 丙酮酸羧化酶的异源表达 | 第36页 |
| 2.3.3 pckA与 pycA单独表达对苏氨酸产量的影响 | 第36-38页 |
| 2.3.4 pckA与 pycA共表达对苏氨酸产量的影响 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 草酰乙酸代谢流向的分阶段调控 | 第40-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 3.1.1 菌种 | 第40页 |
| 3.1.2 主要仪器与试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.3 培养基配制方法 | 第41页 |
| 3.1.4 常用试剂的配制 | 第41页 |
| 3.1.5 本章所用引物 | 第41-42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-47页 |
| 3.2.1 大肠杆菌基因组的提取 | 第42页 |
| 3.2.2 引物的验证 | 第42页 |
| 3.2.3 目的基因的扩增与回收 | 第42页 |
| 3.2.4 重叠延伸PCR反应 | 第42-43页 |
| 3.2.5 目标质粒的提取与酶切回收 | 第43页 |
| 3.2.6 感受态大肠杆菌的制备与转化 | 第43页 |
| 3.2.7 转化细胞的筛选 | 第43页 |
| 3.2.8 大肠杆菌THRD电转化感受态的制备与转化 | 第43页 |
| 3.2.9 菌株THPE1的RNA的提取与反转录 | 第43-45页 |
| 3.2.10 荧光定量PCR检测citA表达量 | 第45-46页 |
| 3.2.11 柠檬酸合酶酶活的测定 | 第46-47页 |
| 3.2.12 大肠杆菌的发酵实验 | 第47页 |
| 3.2.13 高效液相色谱法测定发酵液中的苏氨酸含量 | 第47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-54页 |
| 3.3.1 柠檬酸合酶的过表达对菌体生长和苏氨酸产量的影响 | 第47-49页 |
| 3.3.2 柠檬酸合酶过表达的分阶段调控 | 第49-52页 |
| 3.3.3 天冬氨酸转氨酶的诱导过表达 | 第52-54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-56页 |
| 第4章 辅因子工程促进胞内NAD(P)H再生 | 第56-68页 |
| 4.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.1.1 菌种 | 第56页 |
| 4.1.2 主要仪器与试剂 | 第56页 |
| 4.1.3 培养基配制方法 | 第56页 |
| 4.1.4 常用试剂的配制 | 第56页 |
| 4.1.5 本章所用引物 | 第56-57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-60页 |
| 4.2.1 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌基因组的提取 | 第57页 |
| 4.2.2 引物的验证 | 第57页 |
| 4.2.3 目的基因的扩增与回收 | 第57-58页 |
| 4.2.4 目标质粒的提取与酶切回收 | 第58页 |
| 4.2.5 感受态大肠杆菌的制备与转化 | 第58页 |
| 4.2.6 转化细胞的筛选 | 第58页 |
| 4.2.7 大肠杆菌THRD电转化感受态的制备与转化 | 第58页 |
| 4.2.8 NAD(H)含量测定 | 第58-59页 |
| 4.2.9 大肠杆菌的发酵实验 | 第59页 |
| 4.2.10 高效液相色谱法测定发酵液中的苏氨酸含量 | 第59-60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-65页 |
| 4.3.1 甲酸脱氢酶的表达对菌体生长和NADH含量的影响 | 第60-62页 |
| 4.3.2 谷氨酸脱氢酶与吡啶核苷酸脱氢酶的共表达 | 第62-64页 |
| 4.3.3 甲酸钠添加量的优化 | 第64-65页 |
| 4.4 本章小结 | 第65-68页 |
| 第5章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 5.1 结论 | 第68-69页 |
| 5.2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录 | 第76-80页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
