| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-25页 |
| 1.1 癌症与基因治疗 | 第13-14页 |
| 1.1.1 癌症的现状 | 第13页 |
| 1.1.2 基因治疗 | 第13-14页 |
| 1.2 基因输送技术 | 第14-17页 |
| 1.2.1 病毒载体输送 | 第14-15页 |
| 1.2.2 非病毒载体输送 | 第15-17页 |
| 1.2.3 物理输送 | 第17页 |
| 1.3 细胞水平上非病毒载体的基因递送屏障 | 第17-22页 |
| 1.3.1 细胞内吞 | 第18-21页 |
| 1.3.2 内体/溶酶体逃逸 | 第21-22页 |
| 1.3.3 载体与基因解离及DNA入核 | 第22页 |
| 1.4 原代细胞的转染（树突状细胞） | 第22-24页 |
| 1.5 课题的提出和研究内容 | 第24-25页 |
| 1.5.1 PEI_(25k)/DNA纳米复合物的尺寸对基因转染的影响机制 | 第24页 |
| 1.5.2 BMDCs的三种基因转染方法的研究 | 第24-25页 |
| 第2章 PEI_(25k)/DNA纳米复合物的尺寸对基因转染的影响机制 | 第25-83页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第25-33页 |
| 2.1.1 实验试剂和试剂盒 | 第25-28页 |
| 2.1.2 实验仪器和耗材 | 第28-30页 |
| 2.1.3 菌株，细胞系及实验动物 | 第30页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第30-33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-49页 |
| 2.2.1 质粒的扩增与提取 | 第33-34页 |
| 2.2.2 两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物的制备 | 第34页 |
| 2.2.3 两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物的粒径分布和表面电荷的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.4 两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物的细胞摄取实验 | 第35-36页 |
| 2.2.5 两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物的细胞转染实验 | 第36-37页 |
| 2.2.6 原子力显微镜拍摄两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物的形态 | 第37-38页 |
| 2.2.7 超高分辨激光共聚焦显微镜拍摄PEI_(25k)/DNA纳米复合物的内部形态 | 第38页 |
| 2.2.8 测量电荷和水动力学直径来分析聚电解质浓度对PEI_(25k)链结构的影响 | 第38页 |
| 2.2.9 全内反射荧光显微镜观察细胞摄取过程 | 第38-39页 |
| 2.2.10 不同抑制剂对两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物细胞转染的影响 | 第39-40页 |
| 2.2.11 观察两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物与溶酶体的共定位 | 第40页 |
| 2.2.12 观察两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物与巨胞饮体的共定位 | 第40-41页 |
| 2.2.13 检测细胞内PEI_(25k)/DNA纳米复合物解离情况 | 第41-43页 |
| 2.2.14 检测两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物递送DNA进入细胞核 | 第43-44页 |
| 2.2.15 Western Blot检测两组PEI_(25k)/p TRAIL纳米复合物体外转染情况 | 第44-46页 |
| 2.2.16 两组PEI_(25k)/p TRAIL纳米复合物体外抗肿瘤实验 | 第46页 |
| 2.2.17 两组PEI_(25k)/p TRAIL纳米复合物体内抗肿瘤实验 | 第46-48页 |
| 2.2.18 两组PEI_(25k)/p TRAIL纳米复合物体内局部基因治疗实验 | 第48-49页 |
| 2.3 实验结果 | 第49-82页 |
| 2.3.1 孵育浓度对PEI_(25k)/DNA基因转染效率的影响 | 第49-57页 |
| 2.3.2 反应浓度对所得PEI_(25k)/DNA纳米复合物的形态学影响 | 第57-62页 |
| 2.3.3 纳米复合物结构形态的变化对细胞摄取途径的影响 | 第62-66页 |
| 2.3.4 两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物细胞内吞途径的研究 | 第66-67页 |
| 2.3.5 两组PEI_(25k)/DNA纳米粒的亚细胞分布情况 | 第67-71页 |
| 2.3.6 观察DNA和PEI_(25k)在细胞内的解离 | 第71-73页 |
| 2.3.7 两组PEI_(25k)/DNA纳米复合物递送DNA入核结果 | 第73-75页 |
| 2.3.8 两组PEI_(25k)/DNA纳米粒体外抗肿瘤活性 | 第75-76页 |
| 2.3.9 在皮下肿瘤模型中对比两组纳米粒的体内基因治疗效果 | 第76-80页 |
| 2.3.10 在腹腔肿瘤模型中对比两组纳米粒的体内基因治疗效果 | 第80-82页 |
| 2.4 本章小结 | 第82-83页 |
| 第3章 BMDC的三种基因转染方法的研究 | 第83-111页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第83-87页 |
| 3.1.1 实验试剂和试剂盒 | 第83-85页 |
| 3.1.2 实验仪器和耗材 | 第85-86页 |
| 3.1.3 细胞系 | 第86页 |
| 3.1.4 试剂配制 | 第86-87页 |
| 3.2 实验方法 | 第87-95页 |
| 3.2.1 BMDCs的培养和鉴定 | 第87-89页 |
| 3.2.2 质粒的抽提 | 第89页 |
| 3.2.3 PEI/DNA纳米复合物的制备 | 第89页 |
| 3.2.4 细胞摄取实验 | 第89-90页 |
| 3.2.5 细胞转染实验 | 第90-92页 |
| 3.2.6 三种转染方式后细胞毒性实验 | 第92-93页 |
| 3.2.7 三种转染方式后细胞活性氧的检测 | 第93页 |
| 3.2.8 三种转染方式后细胞凋亡的检测 | 第93页 |
| 3.2.9 三种转染方式后细胞周期的检测 | 第93-94页 |
| 3.2.10 对比三种细胞的增殖情况 | 第94页 |
| 3.2.11 细胞转染后细胞增殖情况的变化 | 第94-95页 |
| 3.3 实验结果 | 第95-109页 |
| 3.3.1 BMDCs的培养和鉴定 | 第95页 |
| 3.3.2 转染PEI/DNA组和电转染裸DNA组在BMDCs中的细胞摄取情况 | 第95-99页 |
| 3.3.3 BMDCs细胞转染结果 | 第99-101页 |
| 3.3.4 BMDCs基因转染后细胞状态的检测 | 第101-104页 |
| 3.3.5 He La细胞基因转染后细胞状态的检测 | 第104-107页 |
| 3.3.6 细胞增殖的分析 | 第107-109页 |
| 3.4 讨论 | 第109-110页 |
| 3.5 本章小结 | 第110-111页 |
| 第4章 全文总结 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-122页 |
| 致谢 | 第122-125页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第125-126页 |
