| 摘要 | 第3-6页 |
| abstract | 第6-9页 |
| 第1章 前言 | 第14-28页 |
| 1.1 研究背景 | 第14-25页 |
| 1.1.1 微藻生物柴油现状 | 第14-15页 |
| 1.1.2 微藻油脂代谢调控研究的现状及发展趋势 | 第15-20页 |
| 1.1.3 盐藻属分子生物学方面的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.1.4 影响微藻油脂生物合成的环境因素 | 第22-23页 |
| 1.1.5 调控基因对油脂合成的调节作用 | 第23-25页 |
| 1.2 研究目的及意义 | 第25-27页 |
| 1.2.1 研究目的 | 第25页 |
| 1.2.2 研究意义 | 第25-27页 |
| 1.3 研究技术路线 | 第27-28页 |
| 第2章 巴夫杜氏藻培养基的优化 | 第28-36页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-29页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.2.2 主要仪器与试剂 | 第29页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第29页 |
| 2.2.3.1 巴夫杜氏藻的培养 | 第29页 |
| 2.2.3.2 单因素实验的设计 | 第29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第3章 限氮条件下巴夫杜氏藻的转录组测序和注释 | 第36-59页 |
| 3.1 引言 | 第36-38页 |
| 3.2 材料与方法 | 第38-41页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.2.2 主要仪器与试剂 | 第39页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第39-41页 |
| 3.2.3.1 藻样品的收集 | 第39页 |
| 3.2.3.2 测定巴夫杜氏藻的油脂含量 | 第39-40页 |
| 3.2.3.3 藻RNA的提取 | 第40-41页 |
| 3.2.3.4 藻RNA的检测 | 第41页 |
| 3.2.3.5 unigene的组装和功能注释 | 第41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-57页 |
| 3.3.1 巴夫杜氏藻的油脂含量 | 第41页 |
| 3.3.2 藻RNA的质量检测 | 第41-42页 |
| 3.3.3 巴夫杜氏藻转录组测序结果概述 | 第42页 |
| 3.3.4 测序数据的过滤 | 第42页 |
| 3.3.5 测序数据的组装 | 第42-46页 |
| 3.3.6 巴夫杜氏藻unigene的功能注释 | 第46-47页 |
| 3.3.7 巴夫杜氏藻unigene的分类 | 第47-57页 |
| 3.3.7.1 巴夫杜氏藻unigene的GO分类 | 第47-52页 |
| 3.3.7.2 巴夫杜氏藻unigene的COG分类 | 第52-54页 |
| 3.3.7.3 巴夫杜氏藻unigene的KEGG分类 | 第54-57页 |
| 3.4 小结 | 第57-59页 |
| 第4章 限氮条件下巴夫杜氏藻的基因表达差异 | 第59-70页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 材料与方法 | 第59-60页 |
| 4.3 结果与分析 | 第60-68页 |
| 4.3.1 对照和处理样品unigene的FPKM分布 | 第60-61页 |
| 4.3.2 对照和处理样品中差异表达unigene的分类 | 第61-67页 |
| 4.3.2.1 差异表达unigene的GO分类 | 第61-63页 |
| 4.3.2.2 差异表达unigene的GO富集分析 | 第63-67页 |
| 4.3.3 对照和处理样品中差异表达unigene的KEGG富集 | 第67-68页 |
| 4.4 小结 | 第68-70页 |
| 第5章 限氮条件下巴夫杜氏藻的蛋白组差异 | 第70-88页 |
| 5.1 引言 | 第70页 |
| 5.2 材料与方法 | 第70-72页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第70页 |
| 5.2.2 主要仪器与试剂 | 第70-71页 |
| 5.2.3 实验方法 | 第71-72页 |
| 5.2.3.1 样品的收集 | 第71页 |
| 5.2.3.2 蛋白的提取 | 第71-72页 |
| 5.2.3.3 蛋白的定量 | 第72页 |
| 5.2.3.4 蛋白质酶解和iTRAQ标记 | 第72页 |
| 5.2.3.5 LC-MS/MS蛋白组分析 | 第72页 |
| 5.2.3.6 蛋白的定量和数据分析 | 第72页 |
| 5.3 结果与分析 | 第72-87页 |
| 5.3.1 蛋白含量及完整性 | 第72-73页 |
| 5.3.2 蛋白组鉴定概述 | 第73-74页 |
| 5.3.3 蛋白组的定量 | 第74-75页 |
| 5.3.4 蛋白的聚类分析/GO注释/COG注释 | 第75-77页 |
| 5.3.5 蛋白的KEGG注释 | 第77-78页 |
| 5.3.6 差异表达蛋白的GO/KEGG富集 | 第78-83页 |
| 5.3.6.1 差异表达蛋白的GO富集 | 第78-82页 |
| 5.3.6.2 差异表达蛋白的KEGG富集 | 第82-83页 |
| 5.3.7 差异表达蛋白的分析 | 第83-87页 |
| 5.3.7.1 与光合作用及Calvin循环相关的蛋白 | 第83-84页 |
| 5.3.7.2 与脂类代谢相关的蛋白 | 第84-85页 |
| 5.3.7.3 与糖类代谢相关的蛋白 | 第85页 |
| 5.3.7.4 与氮素代谢相关的蛋白 | 第85-86页 |
| 5.3.7.5 限氮诱导油脂积累的可能机制 | 第86-87页 |
| 5.4 小结 | 第87-88页 |
| 第6章 巴夫杜氏藻的油脂合成途径预测及分析 | 第88-123页 |
| 6.1 引言 | 第88页 |
| 6.2 材料与方法 | 第88-97页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第88页 |
| 6.2.2 主要仪器与试剂 | 第88-89页 |
| 6.2.3 实验方法 | 第89-97页 |
| 6.2.3.1 基因的 3′-RACE | 第89页 |
| 6.2.3.2 基因的 5′-RACE | 第89-91页 |
| 6.2.3.3 基因的Genome Walking | 第91页 |
| 6.2.3.4 基因的荧光定量PCR | 第91页 |
| 6.2.3.5 融合蛋白的诱导表达 | 第91-92页 |
| 6.2.3.6 wri1蛋白的纯化 | 第92-93页 |
| 6.2.3.7 wri1纯化蛋白的检测 | 第93页 |
| 6.2.3.8 wri1蛋白抗体的制备 | 第93-94页 |
| 6.2.3.9 巴夫杜氏藻样品的染色质免疫共沉淀 | 第94-97页 |
| 6.3 结果与分析 | 第97-121页 |
| 6.3.1 巴夫杜氏藻油脂合成途径的预测 | 第97-104页 |
| 6.3.2 巴夫杜氏藻的油脂合成相关基因的差异表达 | 第104-107页 |
| 6.3.3 油脂积累相关的转录因子wri1的克隆及其性质研究 | 第107-115页 |
| 6.3.3.1 wri1基因cDNA全长的克隆 | 第107页 |
| 6.3.3.2 wri1基因启动子的克隆 | 第107-108页 |
| 6.3.3.3 wri1基因表达水平的变化 | 第108-111页 |
| 6.3.3.4 wri1蛋白的纯化 | 第111-113页 |
| 6.3.3.5 wri1蛋白抗体的ELISA检测 | 第113-114页 |
| 6.3.3.6 染色质免疫共沉淀结果 | 第114-115页 |
| 6.3.4 油脂积累相关的lipase基因的克隆及其性质研究 | 第115-121页 |
| 6.3.4.1 lipase基因cDNA全长的克隆 | 第115-118页 |
| 6.3.4.2 Lip基因的启动子克隆 | 第118-119页 |
| 6.3.4.3 Lip基因表达水平的变化 | 第119-121页 |
| 6.4 小结 | 第121-123页 |
| 第7章 讨论与结论 | 第123-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-141页 |
| 附录 | 第141-142页 |
